실험 Q&A Immunology > Immunocytochemistry
4% PFA가 permeablization에 영향을 주나요?
레벨1 sidsidsid (대학생)
GPCR 을 염색을 하기 위해 실험 중입니다.
receptor specific binding 형광 표지 물질을 사용하고요 (antibody x)
과정은
세포 배지를 제거하고 PBS Washing한 뒤
4% paraformaldehye를 10분동안 RT에 Incubation하고 형광 물질 처리 후 따로 permeablization과정을 하지 않고 물질처리 후 confocal로 관찰합니다.
그런데, 세포질에 염색이 안되고 핵에 염색 되더라구요 (dapi와 겹침)
그래서 living cell에다가 해봤는데 이번엔 세포질에 잘 염색이 되더라고요
핵 부분에는 뻥 뚤린채로요
4% PFA가 문제였던 것 같은데
아무래도 세포가 좀 쪼그라드는 것 같아서 고정을 해야할 것 같은데
농도를 낮추면 permeablization이 덜 할 까요?
4% PFA가 Permablization에 영향이 그렇게 있는건가요? ㅜ
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