실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Sequencing
Cloning -> plasmid extraction -> Sequencing 결과가 이상합니다...ㅠㅠ
레벨2 실험실뵹아리 (과기인)
안녕하세요 실험실뵹아리입니다.
몇 일 전 pGEM T easy vector에 unknown gene을 클로닝하였고 plasmid를 추출하고 sequencing을 의뢰하였습니다.
gene size는 1600~1800bp정도로 추정되어 양쪽에서 읽기위해 M13 Forwad와 M13 Reverse를 primer로 사용하여 의뢰하였습니다.
오늘 결과가 나왔는데 사진에서 보시다시피 Forward 부터 sequencing한 결과는 전체적으로 좋은 quality로 결과가 나왔지만 Reverse 부터 sequencing한 결과는 전반적으로 multi signal로 나왔습니다.
제 생각에는 DNA가 상보적으로 존재하기 때문에 Forward 영역이 잘 읽혔으면 Reverse 영역도 잘 읽혀야 정상이지 않을까 생각되는데 어떤 이유로 이런 결과가 나왔는지 전혀 감을 잡지 못하겠습니다..ㅠㅠ
선생님들께서 알려주시면 저에게 좋은 공부가 될 것 같습니다! 답변 부탁드리겠습니다~!!
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