실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
PCR band가 계속 뜨질 않습니다
레벨1 qazpl3136 (대학생)
학부 연구생으로 실험실에서 mouse tail gDNA genotyping, pcr, gel electrophoresis를 하고 있습니다.
그런데 제가 맡은 samples들에서만 PCR band가 뜨지 않거나 매우 흐리게 뜹니다. Tg mouse tail은 gDNA를 희석시켜 하자 PCR band가 제대로 떴는데, 다른 gene은 희석시켜도 band가 매우 흐리게 뜹니다.
다른 선배님들과 같은 primer, 같은 프로토콜, 같은 pcr기계를 썼는데 저만 자꾸 나오질 않아 gDNA genotyping시 문제가 있었다고 생각하는데 어느 부분에서 문제가 생겼는지를 모르겠습니다. 제가 처음이라 상층액 딸 때 문제가 있었다고 생각되는데 맞는지도 모르겠습니다.
또, 같은 gel을 사용하여 electrophoresis를 하고, 같은 양의 loading dye를 넣었는데도 불구하고, loading dye의 밝기가 gel마다 차이가 있습니다. loading dye가 밝은 것은 pcr band가 밝게 보이는데, 그렇지 않은 것은 pcr band가 보이지 않거나 매우 흐리게 보입니다.
gel은 모두 동일한 프로토콜로 만들어 졌고, dye로는 EtBr을 사용했습니다.
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