실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Transformation
E. coli에 GFP transformation을 시키려고 하는데
레벨1 후_추 (대학원생)
지금 실험실에서 쓰는 GFP 플라스미드가 거의 바닥나서
E. coli에 transform 시키고 추출을 하려고 하는데요.
구글링 해서 나온 사진을 보면 콜로니 만으로도 UV조명 아래서
선명한 초록빛이 나오는 것 같은데
제가 실험한 것은 그냥 허연것이 파란 불빛이 비치기만 할 뿐
초록빛이 나지 않습니다.
어두운 환경에서 UV가 방사되는 기기 주변에서 관찰했을 때
만약 transform이 제대로 이루어졌다면 콜로니가 초록빛으로 빛나는게 맞는 것이지요?
가장 기본적인 프로토콜로 여겨져 아래 내용대로 진행했습니다.
1. thawing E. coli in ice for 5 min.
2. co-incubation with DNA in ice for 30 min.
3. heat shock at 37°C for 45 sec.
4. add 1ml of SOC media
5. transfer to ice for 2 min
6. incubation at 37°C at 225rpm for 1 h.
7. take 100ul of E. coli and spread it on agar plate with antibiotic
8. overnight culture at 37°C
GFP 벡터는 pBI221-GFP이고
E. coli는 competent DH5a 50ul 사용, GFP는 28ng/ul해서
transformation 할 때 총 볼륨 100ul였습니다.
GFP 벡터에 엠피실린 저항성 유전자가 있어서
아가 플레이트에 엠피실린 100ug/ml 섞어서 만들었고요.
다음 날 보니 콜로니가 몇 개 보이는데
UV 조명 아래에서 빛이 나오질 않습니다.
왜이럴까요..
엠피실린 농도가 적어서 많이 살아남은 것인지
아니면 특수한 기구가 있어야 볼 수 있는 것인지
잘 모르겠어요..
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