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레벨2
힘내요
(대학생)
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20.08.19 13:47
안녕하세요 댓글 감사합니다
우선 다 같은 종이고, 2,3번째는 시중에서 판매되고 있는 건조식품입니다! 아마 건조되는 과정에서 DNA가 손상되었을것같아서요 건조식품으로도 PCR이 가능한지 궁금해서 비교한 실험이예요!
건조 방식에 따라 많이 다를겁니다.
미건조 시료와 건조 시료의 gDNA 추출 결과는 어떻나요?
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레벨2
힘내요
(대학생)
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20.08.19 14:03
둘다 양은 비슷하게 나왔지만 비건조된 시료의 순도가 1.8~1.9인데 비해 건조된 시료의 순도는 1.5~1.7 정도로 낮게 나왔습니다
흡광도 말고 전기영동 결과를 확인했나요?
안했다면 확인해 보세요.
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레벨2
힘내요
(대학생)
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20.08.19 14:19
전기영동은 비건조는 끌리긴했지만 main dna가 나오긴했고 건조는 나오지않았습니다
저는 좋지않은 샘플로 pcr 전기영동시, 밴드가 생기지않고 밑으로 내려가져있는 이유가 dna가 손상되어 primer가 결합하지 못하기 때문인게 맞는지 궁금합니다!
건조는 건조과정에서 dna 가 손상입었을거라 생각하는데 맞을까요?
비건조 시료도 끌려서 춫루되었다면 전체 시료의 gDNA 추출이 정상적으로
되지 않았습니다.
또한 분해된 gDNA로 PCR했을 경우 target이 증폭 될지 안될지는 case by case
입니다.
분해 정도에 따라 증폭 될수도 있고 안될수도 있습니다.
하지만 아예 증폭이 안된다면 gDNA 분해 정도를 봐야 원인 추정이 가능할것
같습니다.
gDNA 시진 있으면 한번 올려 주세요.
다음번에는 각 줄마다 마커를 같은 위치에 다 걸어보세요. 같은 양의 마커를.
1번 줄에는 마커를 포함한 모든 밴드가 선명하고 깨끗하게 나오지만 두번째 새번째 줄에는 보통 밴드가 1번 줄에 비해서 흐리게 나오거나 경우에 따라서는 DNA 밴드가 있어도 안보일 수 있습니다.
그 이유는 DNA는 음전하를 띤 분자라서 전기영동장치의 음극에서 양극으로 이동하지만 EtBr은 양전하라서 그 반대방향으로 이동합니다.
젤의 아래쪽, 그러니까 세번째 줄에 있던 EtBr은 젤의 위쪽(음극) 으로 먼저 이동해 버려서 DNA가 염색이 적게 됩니다.
하지만 맨 윗줄의 DNA는 이동하는 내내 EtBr과 만나므로 진하게 염색된 상태를 유지합니다.
저 젤을 EtBr 용액에 넣어서 염색하고 탈염색해 보면 DNA 양에 비례하는 DNA 밴드를 볼 수 있습니다.