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 전체 > Molecular Biology-DNA > Transformation
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질문 Agrobacterium transformation을 위한 vector를 디자인하려고 합니다.
알후_추(대학원생)  | 08.14 17:24

안녕하세요. 대학원 들어와서 처음으로 

아그로박테리움을 이용한 형질전환 실험을 해보려고합니다.

저는 아미노산 8개 정도로 이루어진 간단한 펩타이드를 식물체가

합성하게 만드려고합니다.

프로모터는 CMV35S와 조직에 특이적으로 작용하는 프로모터를 이용하려고하는데요. 

실험실에서 보유중인 CMV35S 프로모터를 포함한 벡터에서 불필요한 부분을 자르고 원하는 펩타이드를 합성할 수 있도록 염기서열을 끼워넣어서 첫번째 벡터를 만드려고 하고, 두번째 벡터는 동일한 벡터에서 CMV35S 프로모터를 잘라내고 원하는 프로모터+원하는 펩타이드를 합성할 염기서열을 넣으려고 합니다.

실험실에는 보통 자주 쓰이는 restriction enzyme들이 구비가 되어있고 어떤 제한효소를 쓸지는 벡터와 집어넣으려는 유전자의 염기서열에 따라 달라질텐데.. 최대한 깔끔하게 잘라서 원하는 펩타이드만 합성할 수 있게 만들고싶습니다.

여기서 궁금한 것이 생겼는데요. 제한효소에 따라서 버퍼 조성이 다를텐데

5'와 3'를 각각 다른 제한효소로 잘라도 될까요?

된다면 버퍼 조성이 비슷한 제한효소를 이용해야 할까요?

 

제가 이해한 것으로는 벡터 안의 프로모터와 유전자 사이에 원하지 않는 서열이 들어가는 것은 불가피하고 사용하는 제한효소의 종류에 따라 프라이머를 제작할 때 염기서열 몇개를 추가로 붙여야 한다는 것인데 바르게 이해한 것이 맞나요?

아예 쌩초보인지라 매우 간단한 팁이나 벡터를 제작할 때 유의할 점을 알려주시면 크게 도움이 될 것 같습니다. 

 

 

 

#아그로박테리움
 
#형질전환
 
#식물
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  08.14 17:43  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

신규 vector를 제조하려면 제한효소 자리만 가지고는 힘듭니다.

우선 질문자가 만들고자 하는 vector를 그려 보세요.

그리고 필요한 부분을 어떻게 준비하고 연결할지 protocol을 준비해 보세요.

제한 효소는 같은 효소, 다른 효소의 문제가 아니라 실험에 맞게 사용가능하면

됩니다.

primer에 제한효소 자리를 붙이면 여분의 염기를 붙여야 자를때 잘 잘립니다.

하지만 8개 정도의 짧은 아미노산 펩타이드는 발현 효율이 낮습니다.

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