실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > mRNA Analysis
RNA 추출 도와주세요
레벨2 가즈아분자생물 (대학원생)
이번에 RNeasy mini kit를 이용하여 RNA를 추출하였습니다
1. HDF cell 1*10^6 cells/6well plate에 seeding하여 24시간 배양
2.10 ug/mL+Sample 처리하여 24시간 배양
3. RNA 추출 과정에서 셀이 적은 것 같아 350 uL RLT를 처리하여 회수하였습니다
저번에 실험하니 A260/230 수치가 낮은 것을 확인 하여
이번 실험에서는 유기용매가 유입되지 않게 컬럼 주변도 닦아가며, tube도 바꿔주며 단계단계 진행을 하였습니다.
그런데
Sample Name | Nucleic Acid(ng/uL) | A260/A280 | A260/A230 | A260 | A280 | Nucleic Acid Factor | Baseline Correction (nm) | Baseline Absorbance |
Sample 1 | 71.826 | 2.098 | 1.151 | 1.796 | 0.856 | 40 | 340 | -0.106 |
Sample 2 | 86.085 | 2.055 | 0.678 | 2.152 | 1.047 | 40 | 340 | 0.023 |
Sample 8 | 14.003 | 2.21 | 0.459 | 0.35 | 0.158 | 40 | 340 | 0.179 |
나노 드랍을 이용하여 측정해보니, cDNA합성 하지 못할 수준으로 나왔더라구요
문제가 무엇인지....
Sample 1.의 경우 A280수치가 낮은 것으로 보아 셀이 부족했던 것일까요?? 그렇다면 cell seeding을 더 많이 할지, RLT를 더 적게 처리해야 할지..
Sample 2-3.의 경우 A260/230 수치가 너무 낮은 것 맞죠? 유기용매 유입된 것으로 보이는데,,,이번엔 실험에서는 단계단계 신경써서 했는데 또 수치가 낮게 나오네요
문제가 무엇인지...ㅠㅠ 몇일 동안 RNA추출만 하고 있습니다
도와주세요
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