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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 고등학생이 동아리 활동으로 PCR을 하는데 질문이 있습니다ㅜㅜ
알adenine00(일반인)  | 08.12 23:25

현재 동아리 활동으로 PCR 실험을 하려고 준비하고 있습니다.

생명 선생님께서 도와주셔서 PCR을 위한 기본 buffer나 DNA, 프라이머 같은 시료를 구입했습니다. 기구도 학교에 거의 다 있고요.

그런데 PCR 후에 결과를 확인하기 위해서 agarose gel을 이용한 전기영동을 하려고 했는데 학교에 agarose 분말만 있고 TAE buffer나 EtBr 같은 색소가 없더라구요ㅜㅜ

지금 학생부 마감이 얼마 남지 않아서(고3) 실험을 빠르게 진행해야 하고, 예산도 더 못 받을 것 같아 고민이 많습니다.

그래서 일단 지금은 PCR을 진행한 후에 결과물을 보관하고, agarose gel을 만드는 대로 전기영동을 진행하면 어떨까 해서 여쭤봅니다.

 

1. TAE buffer를 사용하지 않고 다른 완충용액을 사용하는 것은 불가능한가요?? 간단히 만들 수 있는 용액이 있을까요??

2. EtBr 외에 쉽게 구할 수 있는 전기영동 색소는 없을까요?

3. 마지막에 덧붙인 것처럼 PCR 결과물을 보관했다가 이후에 전기영동을 해도 문제가 없을까요??

대답해주시면 정말 감사하겠습니다ㅜㅜ

#PCR
 
#전기영동
 
#TAE
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리느림보  |  08.13 07:19  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
전기영동 버퍼는 Sodium borate buffer가 가장 싸고 구하기 쉽습니다. 염색은 Methylene blue staining가 차선책입니다. 두가지는 안전과 비용을 따져야 하는 고등학생 일반인 실험에서 많이 쓰는 조건입니다.
PCR 후에 냉동보관하면 됩니다. 수분이 날아가지 않게 단단히 뚜껑을 닫고 비닐로 다시한번 밀봉 해 두세요.
알adenine00  |  08.13 09:02  
감사합니다 선생님ㅜㅜ
메틸렌블루는 있을 것 같습니다 감사합니다ㅜㅜㅜㅜ
seol2  |  08.13 12:38   

0.5% TBE buffer로도 가능합니다.

seol2  |  08.13 12:42   

EtBr 대신 메틸렌블루나 RedSafe라는 시약도 많이 사용하시구

5X TBE buffer는 

TRIS 54g, Boric acid 27.5g, 0.5M EDTA(pH 8.0) 20mL,
나머지는 3
차 멸균수를 넣어 1L로 맞추시면 됩니다.

이드  |  08.13 15:28   

enzynomics 같은 회사에서 만들어진 50X TAE buffer 250ml을 15,000 가량에 판매하고 있습니다. 주문하면 1~2일 이내에 금방 도착하니 이걸 사용하는걸 추천드립니다.

물론 1X 또는 0.5X로 희석해서 사용하면 됩니다.

 

염색은 EtBr 자체가 발암물질이라 사용을 권하진 않습니다...

윗분이 말씀하신 메틸렌블루? 를 사용하는것도 방법이겠네요.

저는 메틸렌블루를 사용해본적은 없어서 다른 말씀은 못드리겠네요 ㅎㅎ..

제가 사용하는 제품은 88000원에.. 배송이 2~3일정도 소요되서 금액지원을 못받으면 부담이될수있겠어서요..

알adenine00  |  08.13 16:14  
답변해주신 분들 모두 감사합니다.
1~2일 내에 도착하고 15000원 가량이면 이걸 사용해도 되겠네요 감사합니다.
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