실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
Cloning 과정에서 질문
레벨2 후기대학원생 (대학원생)
현재 대학원에서 인턴을 하고 있는 학생입니다.
지금 Cloning 실험을 하고 있는 도중에 몇가지 질문이 있어서 올리게 되었습니다.
1. Insert & Backbone DNA를 제한효소 처리한후에 Backbone의 경우에는 전기영동을 통해서 잘 잘렸는지 확인을 하는데 Insert의 경우에는 전기영동을 하지 않고 바로 ligation 실험에 사용을 하는데 Insert를 제한효소를 처리한후에 확인하지 않는 이유가 있는가요..??
2. ligation이후에 transformation을 하고 LB plate(+Amp)에 spreading을 해주고 그다음날 콜리니가 생성되었는지 관찰을 했는데 매번 colony가 생성되지않고 spreading 한 흔적만 남아있는데 실험을 준비하는 과정에서 오염되어서 그런걸까요??(실험에 사용한 LB Broth와 LA Broth들을 다시 만들어주었고 spreader의 경우에도 전부 다 세척을 한뒤 알코올을 뿌려주어서 닦아낸뒤에 사용을 했습니다. LB plate(+Amp)의 경우에는 다른 실험실 선배님들께서 만들어놓은 plate를 사용했는데도 실험결과는 동일했습니다.)
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