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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 181  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 BCA Assay 할 때 OD값이 높은 경우
뒷다리ABOO(대학원생)  | 08.11 10:56

안녕하세요

Western blot 하기 전 BCA Assay 를 진행하였는데

OD값이 2.XXX 1.XXX 이런식으로 너무 높게 나오고 있어

문제를 겪고 있습니다....

현재 샘플은 펠렛에 200ul의 Lysis buffer를 섞은 상태인데

이런 경우 

1) Sample 20ul + Lysis buffer 200ul => 10x dilution 

이렇게 다시 샘플을 만들어서 진행해보는 것이 맞나요..? 

그리고 OD값이 1 이하로 나와야 하는 이유도 알 수 있을까요?

#Protein
 
#BCA
 
#Western blot
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  08.11 11:35  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

sample의 OD값은 STD 범위에 들어가면 문제없습니다.

STD 범위를 벗어나면 희석해서 측정하면 됩니다.

10배 희석의 경우

Sample 20ul + Lysis buffer 200ul => 10x dilution = X

Sample 20ul + Lysis buffer 180ul => 10x dilution = O

뒷다리ABOO  |  08.11 13:54  

Speed 님께, 

선생님 답변 정말 감사드립니다.

Standard 값이라고 하시면 제가 현재 Protein측정하는 방법은

BCA Assay인데 이 때 BSA를 0 5 25 50 125 250 ug 이렇게

계단희석을 해서 사용하는데요, 

만약 250의 OD값이 0.443이라면 0.443이하로만 나오면 된다는 말씀이신가요?

그리고 계산식 수정해주셔서 감사드립니다..! 

대왕개구리SPEED  |  08.11 14:02  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

STD curve는 STD 범위에 들어가는 시료의 농도를 측정하기 위해서 측정하는

것이기 때문에 STD 범위의 최고 농도 안으로 시료의 농도가 들어오면 됩니다.

 

뒷다리ABOO  |  08.12 09:22  

아 그렇군요!

선생님 정말 감사드립니다 ㅎㅎ 

샘플 희석해서 실험 진행해보도록 하겠습니다! 

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