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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
조회 178  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 enzyme cut
올챙이바방바바방(대학생)  | 08.10 18:02
저는 현재 xho1이랑 not1으로 cloning을 하려고 하고있습니다 근데 insert DNA를 PCR 후 gel puri를 했는데 농도가 70ng/ul이 나왔는데 제 생각에는 농도가 많이 낮다고 생각하는데 진행을 계속 하도 괜찮을까요? 농도가 높을수로 ligation이 잘 된다고 들었습니다!
#cloning
 
#enzyme cut
 
#puri
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  08.10 18:05  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

농도가 높으면 높을수록 잘되는 것은 아닙니다.

vector와 insert의 순도가 좋아야 되고, CP cell과 ligation 효율도 좋아야 합니다.

현재 농도로도 cloning이 충분합니다.

올챙이바방바바방  |  08.10 18:12  
효소 처리는 이번이 처음이라 그러는데 xho1 not1 처리를 동시에 처리해도 괜찮은지 안몬 차례로 하나 처리후 purification하고 또 purification한 뒤 ligation을 하는것이 더 좋을까요?
대왕개구리SPEED  |  08.10 18:48  

동시에 처리하는것 보다 따로 처리하는것이 좋지 않을까요?

만약 동시에 처리하려면 NotI buffer로 하면 되는데 나중에 cloning이 안되면

처음부터 다시 원인을 찾아야 하기 때문에 따로 처리하는것이 좋을겁니다.

primer 말단에는 여분의 염기를 3개 이상 붙였나요?

올챙이바방바바방  |  08.10 20:26  
네 제작할때 그렇게 했습니다 저번에도 그렇고 감사합니다!!!ㅎㅎㅎㅎ
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