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질문 cytokine ELISA 샘플 희석을 FBS가 들어있는 배지로 하면 문제가 있나요??
알김아무개씨(대학생)  | 08.08 15:41

안녕하세요.
ELISA 실험 배운지 얼마 안 되서 아직 모르는게 많은 한 학생입니다.

현재 caco-2 cell에
LPS만 처리
LPS + LPS 활성 억제하는 약물 처리
이렇게 두 그룹으로 나눠놓고 배지 채취해서 IL-8 ELISA를 여러번 진행 중인데
IL-8의 분비량이 LPS 그룹하고 약물 처리 그룹하고 똑같다는 결과가 계속 나옵니다..

LPS에 대한 효능이 분명한 약물을 문헌 찾으면서 정한 농도로 처리한 건데도 이럽니다.

실은 약물 처리후 채취한 샘플을 FBS 10%가 포함된 배지를 가지고 희석을 했었는데 이게 원인이 아닌가 싶습니다.

제가 샘플을 FBS 포함된 배지에 희석하면 되는지 안되는지에 대한 얘기는 못찾았지만 ELISA sample 희석용 용액이 따로 제품으로도 있다는 것을 확인했습니다.

혹시 ELISA sample  희석용 용액을 안쓰고 FBS 포함한 배지를 사용한게 큰문제가 되나요?

#ELISA
 
#ELISA 샘플 희석
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  08.08 16:12  

그룹간에 IL-8 농도 차이가 있으면 FBS에 cytokine이 포함되어 있더라도 결과

값은 달라집니다.

FBS Media에 희석한 특별한 이유라도 있나요?

FBS나 media에 희석하는 것 보다 PBS에 희석하는 것이 좋을 듯 합니다.

FBS문제는 아닌듯 하고 LPS 무처리군 하고 LPS만 처리한 군에서 IL-8 농도

차이는 얼마나 되나요?

알김아무개씨  |  08.09 12:05  

LPS group이 평균 800pg/ml  나왔고 LPS, 약물 둘다 무처리인 control group이 평균 450pg/ml 정도로 나왔습니다.(참고로 모든 샘플은 FBS 포함한 배지로 원액을 3배 희석을 했고 ELISA 결과로 나온 값에 3배를 하여 얻은 수치입니다.)

제가 FBS 포함한 배지로 샘플 희석을 해본이유는 어쨌거나 약물 처리하고 세포 배양했던 샘플 배지(채취할 샘플 용액)는 기본적인 용매가 FBS 포함된 배지이기 때문에 채취후 희석을 아무 생각없이 FBS가 포함된 배지로 진행을 했었습니다.

대왕개구리SPEED  |  08.09 16:39  

ELISA 시료의 희석에 FBS가 문제없다고 하더라도 불필요한 단백질이 많은

용매로 희석하는 것은 좋지 않습니다.

FBS 만 ELISA해보면 별 문제 없는 것을 확인할 수 있을겁니다.

무처리군과 LPS 처리군의 IL-8 농도 차이가 별로 안나고 무처리군에서 많이

나오는것 같습니다.

그리고 LPS 활성 억제 약물은 검증된 물질인가요?

FBS 문제 보다는 cell, 시료처리 실험 문제로 보입니다.

 

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