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 전체 > Molecular Biology-DNA > Transformation
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질문 plasmid DNA mini prep 질문 있습니다
알wassupyall(대학생)  | 08.08 05:02

대학원 신입생입니다.

1. plasmid DNA purity (abs 260/280) 측정시 보통 1.9~2.1가 좋은 purity라고 하던데, 1.9~2.0 보다 더 높은 값(2.0~2.1미만)이 나오면 purity가 더 좋다는 의미인가요? 아니면 1.9~2.1 사이 아무값만 나오면 purity는 다 좋다고 볼 수 있는건가요? 

2. Transformation을 한 competent cell을 agar에 배양시켰는데, 아무것도 자라지 않은 경우는 어떤 문제가 있는건가요? Ampicillin 농도, heat shock 처리시간 등 transformation protocol은 잘 지켰습니다. 기존의 plasmid 농도나 purity에 문제가 있어서 transformation이 아예 안됐을 가능성이 높을까요???

3. 제 사수는 1.9~2.1이 이상적인 purity값이라고 했는데, 혹시 1.85~1.89 사이값이 나와도 큰 문제가 없나요??

감사합니다!

#plasmid DNA purity
 
#transformation
 
#min prep
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알서크사크  |  08.08 09:45  

저는 평균적으로 1.86 정도로 plasmid를 뽑게 되는데요 솔직히 plasmid가 잘만 만들어졌으면 transformation은 문제 없이 진행된다고 생각합니다. purity값은 문제 없다고 생각됩니다. 넣어주시는 plasmid의 농도를 높여주시던지 아니면 healing 하는 과정을 생략하셨는지 한번 확인해보세요

대왕개구리SPEED  |  08.08 11:10  

이론과 실제는 다릅니다.

1. 흡광도 purity는 어디까지나 purity의 지표일 뿐 정상범위를 벗어 났다고

사용하지 못하는 DNA는 아닙니다.

1.8이 나와도 사용가능하고 2.1이 나와도 prep.이후 제한하쇼처리, 정제 ligation

과정에서 문제거 있으면 아무라 purity좋은 DNA를 사용해도 cloning은

힘듭니다.

purity에 너무 연연하지 않아도 됩니다.

2. TF가 안되는게 여러 원인이 있습니다.

CP cell. ligation, TF 방법 등 3 범위에서 확인해 보세요.

단순히 왜 안되는냐를 찾기는 힘듭니다.

그리고 purity문제는 절대 아닙니다.

지금까지 100개 이상 cloning해 왔지만 purity에 별로 신경쓰지 않고 실험해왔고

가장 중요한 것은 vector와 insert를 잘 준비하는 것입니다.

ligation에 사용한 vector와 insert 사진이 있으면 첨부해 주세요.

3. purity는 문제가 안됩니다.

prep.한 vector 전기영동 사진 있으면 첨부해 주세요.

 

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