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 전체 > Immunology > ELISA
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질문 ELISA 데이터 처리 시 linear vs. 5 parameter logistics
알슨배림(과기인)  | 08.07 08:12

안녕하세요.

 

현재 BSA를 이용한 BCA assay를 통해 ELISA 연습을 하는 중이고 thermo fisher사의 pierce kit를 이용하여 실험합니다.

 

동봉된 2 mg/mL의 BSA standard material을 serial dilution에 사용하는데 프로그램상 linear로 계산을 하면 0.5 mg/mL부터 back calculation 값이 0.592 mg/mL로 측정되더니 마지막 0.031 mg/mL의 값은 -까지 나옵니다.

그래서 엑셀로 데이터를 처리하면 recovery가 터무니 없습니다.

 

그런데 5PL로 계산하면 back calculation 값이 잘나오구요.

 

이 kit는 이미 2 mg/mL ~ 0.02 mg/mL까지 linearity가 확보된 kit라고 하는데 왜 저는 linear curve와 5PL curve가 일치하지 않을까요? ㅠㅠ

 

찾는데 잘 안나와서 여쭤봅니다.

 

upload_image

#ELISA
 
#BCA assay
 
#standard curve
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  08.07 11:45  

BSA 0mg값은 어떻게 처리했나요?

알슨배림  |  08.07 13:56  

Blank는 마지막 H열에 두었고 시스템상에서 자동으로 각 well값에서 빠지는 것으로 알고 있습니다!

OD 값 자체는 각각

 

linear

-0.001 0.001 0.001

5 parameter

-0.001 0.001 0.001

 

로 얻어졌습니다.

대왕개구리SPEED  |  08.07 14:12  

계산을 해보니 R^2 값이 0.9871 정도 나오는데 BCA에서 STD의 경우 0.99xx가 나옵니다.

희석에 작은 오차가 발생하는 것 같기 때문에 우선 희석에 주의해서 다시 측정해 보세요.

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