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질문 pET 벡터 사용 - tag필요하지 않을 경우
알송22222(대학생)  | 08.06 15:00
첨부파일 파일첨부: 질문2.JPG (40 KB)
이미지 첨부파일

합성한 유전자는 현재 pUC19 vector에 있는데  단백질 발현을 위해  pET계열 vector로 옮기려 합니다.

다만 제가 합성한 gene은 이미 his tag과 시그널시퀀스, 시작코돈, 종결코돈이 모두 있어  pET으로 발현시 생기는 부가적인 tag들은 필요하지 않습니다.

살펴보니 pET시리즈는 대부분 tag이 붙어있거나 Nde1 사이트로 인해 시작코돈이 생겨 제가 원하지 않는 단백질 부분 까지 붙어버릴것 같은데

 

이러한 문제점이 없는 pET vector나 혹은 다른 발현 vector시리즈가 있는지 궁금합니다.

제가 사용하는 제한효소는 BamH1과 Ecorl1입니다.

#pET vector
 
#expression vector
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  08.06 15:19  

현재 ORF에 종결코돈이 있으면 c-term은 문제가 없으며 n-term은 생각을

해봐야겠네요.

단백질 발현용 ORF는 제한효소를 정해놓고 vector를 선정하려면 힘듭니다.

vector를 선정해 놓고 제한효소 말단을 정하는 것이 좋습니다.

n-term은 BamHI을 변경해야 할지도 모릅니다.

 

지나가다  |  08.07 11:35   

pET vector를 그래도 이용하고 싶으시면 pET vector를 PCR해서 만드세요.

필요한 부분만 남기고 BamHI, EcoRI site가 양쪽으로 들어가게 pET vector를 PCR해서 BamHI, EcoRI 절단해서 만드세요.

PCR시 돌연변이율이 낮은 Taq을 이용하면 문제없습니다.

사람들이 흔히 insert는 PCR로 얻는게 문제없다고 생각하면서 vector는 PCR 할수 있다는 생각들을 많이 안하더라고요. 원하는 site를 집어넣어서 vector를 디자인하고 만드셔서 사용하시는 것도 방법인데요.

pET vector에서 원하는 부분만 남겨두고 다 없어지게 primer 디자인해서 PCR로 vector 만들어서 쓰는 것도 방법중 하나입니다.

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