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1. antibody는 바꿔보셨나요?
1- 다른 세포에선 해당 항체로 Bcl-2 검출이 됐었는지? (혹은 positive control에서)
2. Bcl-2는 분자량이 좀 작았던 걸로 기억하는데 다른 저분자 단백질들은 잘 나오시는 지?
3. 아니면 일단 Ponceau S로 봤을 때 Bcl-2가 나올 사이즈에 밴드들이 잘 나오나요?
4. qPCR로 mRNA 발현량은 어떤지 체크해보셨나요
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레벨1
Q.E.D.
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20.08.04 13:39
방법은 어떻게 하셨는지 모르지만
우선 제 항체 리스트를 보니
저 항체로 1:500을 했을 때 밴드가 수월하게 나왔었어요 참고하세요
Base는 1% skim milk입니다.
BSA라고 안 써둔걸 보니 그걸로 하면 안 나왔었나봐요^^
1차 항체만 200여개가 넘어서 다 기억 안 나네요ㅋㅋ
혹시 본인이 이렇게 종류를 많이 실험을 하면
조건 표를 만들어 두면
다음번에 하기 편해요~
그리고 28kDa정도라서 완전히 작은건 아니지만
gel %를 12.5%정도로 해 보고
그래도 안 나오면 glycine base gel 말고
Trycine?이었나 스펠링 맞나요ㅋㅋ
이걸 베이스로 한 겔 쓰세요
이게 작은 분자 단백질을 좀 더 잘 잡아요~
그럼 수고하세요!
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레벨5
안녕난세포야
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20.08.07 07:53
해볼건 많습니다만.. 오랜 시간을 끌은 만큼 한번에 할 수 있는 것을 최대한 다 해봐야할것같습니다.
1. blocking solution: BSA와 skim milk 각각
2. sample buffer 다시 만들기 또는 다른종류의 샘플버퍼 사용해보기
3. expose 후 membrane을 amido black 또는 ponsue s로 염색해보기
4. 다른 Ab 사용해보기
5. transfer가 semi-dry 방식이라면 wet, O/N으로 해보기
이정도 생각이 나네요