[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 sale 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
검색광고안내
시마즈(SHIMADZU) 제작소 탐방기 - 1편
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Cell Biology > etc.
조회 364  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 western blot으로 특정 인자 band만 계속 안나옵니다 (bcl-2 보신 분 도움 부탁드립니다)
올챙이진저브래드트윅스(대학원생)  | 08.04 13:08

안녕하세요, HepG2 cell로 실험 진행중인 대학원생입니다.

 

다름이 아니라 western blot으로 각종 인자들의 발현을 보는 중인데, bcl-2 band가 계속 안나옵니다 ㅠㅠ

 

단백질량을 60까지 올려서 실험도 해보고, 노출 시간을 3시간으로 늘려보기도 하고, ecl solution을 강한 것으로 사용하여 실험해보기도 했는데 흔적조차 나오지 않네요,,ㅜㅜ

 

bcl-2가 중요한 인자라 꼭 나와야 하는데 한 학기 째 나오지 않아 걱정입니다. 혹시 도움 주실 수 있는 분 있으신가요?

#westernblot
 
#bcl-2
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리무광  |  08.04 13:24  

1. antibody는 바꿔보셨나요?
 1- 다른 세포에선 해당 항체로 Bcl-2 검출이 됐었는지? (혹은 positive control에서) 
2. Bcl-2는 분자량이 좀 작았던 걸로 기억하는데 다른 저분자 단백질들은 잘 나오시는 지?
3. 아니면 일단 Ponceau S로 봤을 때 Bcl-2가 나올 사이즈에 밴드들이 잘 나오나요?
4. qPCR로 mRNA 발현량은 어떤지 체크해보셨나요

개구리Q.E.D.  |  08.04 13:39  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
첨부파일 파일첨부: Screenshot_20200804-133718_Adobe Acrobat.jpg (45 KB)
이미지 첨부파일
방법은 어떻게 하셨는지 모르지만
우선 제 항체 리스트를 보니
저 항체로 1:500을 했을 때 밴드가 수월하게 나왔었어요 참고하세요
Base는 1% skim milk입니다.
BSA라고 안 써둔걸 보니 그걸로 하면 안 나왔었나봐요^^

1차 항체만 200여개가 넘어서 다 기억 안 나네요ㅋㅋ

혹시 본인이 이렇게 종류를 많이 실험을 하면
조건 표를 만들어 두면
다음번에 하기 편해요~

그리고 28kDa정도라서 완전히 작은건 아니지만
gel %를 12.5%정도로 해 보고
그래도 안 나오면 glycine base gel 말고
Trycine?이었나 스펠링 맞나요ㅋㅋ
이걸 베이스로 한 겔 쓰세요
이게 작은 분자 단백질을 좀 더 잘 잡아요~
그럼 수고하세요!
개구리안녕난세포야  |  08.07 07:53  

해볼건 많습니다만.. 오랜 시간을 끌은 만큼 한번에 할 수 있는 것을 최대한 다 해봐야할것같습니다.

1. blocking solution: BSA와 skim milk 각각 

2. sample buffer 다시 만들기 또는 다른종류의 샘플버퍼 사용해보기

3. expose 후 membrane을 amido black 또는 ponsue s로 염색해보기

4. 다른 Ab 사용해보기

5. transfer가 semi-dry 방식이라면 wet, O/N으로 해보기

 

이정도 생각이 나네요

답변하기
할인행사 광고 검색광고
케이비티 케이비티
Mixer, Dry Bath, Heating Block, Thermo Shaker, Shaking Incub.. (10.22까지)
다온비에스 다온비에스
내 소중한 세포를 위해 안심하고 맡길 수 있는 WOLF Cell Sorter를 경험하세요! (12.31까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
무료 샘플로 명품 NEB의 DNA/RNA Purifucation 성능을 경험하세요. / COVID-19 연구.. (9.29까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
[에펜도르프코리아] Eppendorf 2020 하반기 프로모션 행사 : 실험실 필수품 피펫,원심분리기,PCR.. (12.31까지)
인성크로마텍 인성크로마텍
Phenotype MicroArray™ - Live Cell 에너지 대사 & 감수성 프로파일링 (10.31까지)
브래디 브래디
[브래디] 초저온라벨 등 실험실용 라벨링 솔루션 (COVID19 안전사인 등) (10.30까지)
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
TECAN 한국대리점 20주년 기념 Microplate Reader & Washer 할인이 쏟아진다! (12.31까지)
프리미엄 등록안내
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
6/6  좌우
238,70071,700
79,50075,600
242,40072,800
201,30060,400
136,000
143,800136,700
924,000
47,20044,900
136,000129,200
555,000
739,000702,100
887,200266,200
139,000132,100
158,40047,600
22,7006,900
245,20073,600
309,000
80,40024,200
379,000
230,000
388,500116,600
793,400238,100
246,60074,000
50,00015,000
최근등록   더보기 >
PCR primer design에 대해서 알려주세요 ㅠㅠㅠ   09.19
증균액과 희석   09.18
분자요리 캐비어 원리   09.18
DNA digestion 프로토콜   09.18
미생물 분리 동정 실험 준비물   09.18
고체배지로 측정한 낙하균을 액체시료로 쓸 수 있는 방법이 있을까요??   09.18
BSA standard curve.. 질문 ..   09.18
RNA 추출시 RNA degradation이 일어나는 문제가 있습니다.   09.18
Callus 유도와 관현하여 질문드립니다! ( 병풀 캘러스 유도 해보신 분 있으실까요?)   09.18
cell seeding 계산입니다.   09.18
메틀러 토레도
실험관련연재
박은총 연재중후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
Mr.S 연재중의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재중실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
이제욱 연재중생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아 광고