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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 WB sample 농도
개구리실험어렵다(대학원생)  | 08.04 12:47

안녕하세요 초보실험생입니다

제가 WB을 처음셋팅해서 결과가 안나와서 하루하루 깨지고 있는대요 ㅠㅠ

한가지 질물이 있습니다

WB sample 을 걸때요

만약에 1번은 70ug짜리 샘플을 10ul을 걸고 2번은 50ug짜리 샘플을 15ul을 실험을 했다고 하면

1번은700ug 2번은 500ug 으로 실험한게 아닌가요?

이번에 50ug으로 걸어보자고 하면 샘플양을 로딩할때 샘플농도에 상관없이

50ul을 로딩하라는 건가요?

기초적인 질문일수도 있지만 부탁드려요

#WB
 
#Sample양
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
앞다리miRNA  |  08.04 12:55  

농도 단위가 잘못된거같은데요 ... 

70ug/ul 짜리를 10ul 걸었으면 700ug 맞는건데  WB 샘플을 70ug/ul로 만든건 본적이 없어서..... 

 

단위를 명확히 하고 다시 계산해보세요 ... 

개구리힘들다힘들어  |  08.04 12:58  

70ug을 10ul 건게 어떻게 700ug으로 계산이 되는지 저는 전혀 이해가 안가네요....

50ug을 걸자고 했을 때 50ul를 걸려면 샘플을 1ug/ul로 만들어놔야 가능하겠죠?

대왕개구리SPEED  |  08.04 13:22  

질문은 최대한 정확한 내용으로 자세히 해야지 답변을 하는 사람들이

이해하기가 편합니다.

"70ug짜리 샘플을" - 무슨 뜻인가요?

개구리무광  |  08.04 13:26  

다른거보다
농도와 무게 등 단위의 정의에 대한 정확한 이해가 필요하신 것 같습니다;

개구리Q.E.D.  |  08.04 13:33  
우습게 보는것도 무시하는것도 아니라
지금 농도와 단위 개념이
하나도 적립이 안 되어 있습니다.
공부 하시고 실험을 진행하셨으면 합니다.

샘플 만들고 BCA등을 할 때
샘플 만드는 법도 다시 파악해 보세요
그럼 수고해요
올챙이콩순이  |  08.05 11:40  
70 ug 짜리 샘플의 Total volume이 얼마입니까?

70ug/total volume으로 해야 ug/ml이 나옵니다.

Total protein / Total volume

다시 무슨일이 있었는지 생각해보세요
셀 펠렛에 라이시스버퍼 넣어줬을거고
센트리돌리고 상등액 얻은것 중에서
OD값재고 옆에 선배가 셀 라이세이트 얼마를 넣으라고 했을까요? 그게 얼마에 해당하는 양이라고 했을까요?
보라색 샘플버퍼 다 넣고나서 샘플 쿠킹할때
총 얼마의 단백질이
총 얼마의 ul에 있었을까요?

그때 총 vol이 100ul였다면

총 70ug/ 총 100ul이기때문에
샘플의 농도는 0.7ug/ul입니다.
여기에서 10ul 따서 걸었다면 토탈 7ug 걸었습니다.



반복해서 위의 글을 읽고, 다시한번 생각해보세요.



이해 되나요?

웨스턴 할때 단백질 양을 50 ug이상 잘 안걸어요
700ug으로 웨스턴을 했다면
학계에 보고할 일이군요 ㅎㅎㅎㅎㅎㅎ

농도계산 어려워하는 대학원생들 많이 봅니다. 지금이라도 늦지 않았으니, 농도 파트 확실히 하고 넘어가기 바랍니다.

화이링~
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