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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 sds PAGE 시 protein이 내려가지 않습니다.
알푸룬(대학생)  | 08.03 14:35
첨부파일 파일첨부: sds PAGE.jpg (56 KB)
이미지 첨부파일

Stacking gel, seperating gel PH 모두 확인하였고 sample buffer와 머캅토에탄올 아크릴아마이드 등 오래된 시약들은 다 바꿨습니다.
Protein extraction에서 문제가 있었을까 하고 RIPA 버퍼도 새로 샀지만 어디서도 해결책을 얻을수가 없습니다 ㅠㅠ
ladder는 잘 내려오는데 protein이 안내려오는거면 protein sample의 문제가 확실 한걸까요..?
답변 부탁드립니다

#protein
 
#protein extraction
 
#sds PAGE
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  08.03 14:38  

sample 문제는 아니고 buffer 문제 같습니다.

sample buffer 조성과 boiling 조건은 어떻게 되나요?

marker의 band를 보니 gel도 상태가 좋지는 않습니다.

알푸룬  |  08.03 15:02  

sample buffer는 bio rad사의 2x laemmli sample buffer로 950ul에 머캅토 에탄올 50ul 비율 맞춰서 사용 하고 있습니다.

boiling 은 70도에서 10분하는데 boiling이 문제인가 싶어 95도에 10분 해봤는데 결과는 똑같았습니다.

 

 

 

대왕개구리SPEED  |  08.03 15:09  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

설명을 보면 별 문제가 안보입니다.

sample 문제인지 확인하기 위해서 lab에 BSA가 있으면 2ug 정도 전기영동

해보세요.

BSA가 잘 내려가면 sample문제이고 잘 안내려가면 전기영동 system 문제로

봐야 할것 같습니다.

알푸룬  |  08.03 15:29  

넵 조언 감사합니다!

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