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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 도와주세요 ㅠㅠ PCR 예상 외(?)의 밴드 나타날시에
알sidsidsid(대학생)  | 08.01 18:46

Real time pcr (qPCR)아닌 RT-PCR 실험중입니다. 

다름이 아니라, 제가 원하는 크기의 밴드가 아닌 다른 곳에서 밴드가 나옵니다. 

유전자 A와 B를 보고 있는데 둘다 같은 리간드 (호르몬)을 잡는 receptor입니다. 

예를 들면 A=인슐린 receptor 1이고 B=인슐린 receptor 2입니다

A는 172bp 로 primer로 짯고 B는 98bp로 짯는데 

두개가 반대로나옵니다. A가 98쯤에 나오고 B가 170쪽에 밴드가 진하게 나옵니다. 둘다 잡밴드는 거의 없이 나오고요 

처음엔 제가 primer를 라벨링을 잘못한줄 알앗는데, 그것도 아니었고

심지어 다른 cell line에서 했을때도 두 cell line에서 똑같이 바뀐 bp로 밴드가 나옵니다 ㄷㄷ 

primer를 짠 회사에서 라벨링을 잘못했나 의심이 가서 분석을 의뢰했는데mass 분석했을때에 문제없고 

그래서 회사에서 다시 보내줬는데 또 뒤바뀐 형태의 band가 나옵니다.

 

두 primer 모두 blast 돌려보면 

A는 172bp 아니면 다른 gene이 200bp나 2000bp에서 나오는데 밴드는 98쯤에서 나오고요 

B는 blast 돌리면 98bp인 그 receptor 하나밖에 안나옵니다 

 

이런일이 있을 수 있는건가요? 원인을 모르겟어요 ㅠㅠ  

#pcr
 
#rtpcr
 
#band
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이끄적여봅니다  |  08.03 10:19  

PCR product 서열분석해보셨나요??

김소장  |  08.13 23:15   

간혹 일어나는 일입니다.

프라이머를 다른 엠플리콘을 타겟으로 제작하세요

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