실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
DNA 전기영동 시 smear 현상 문의ㅠㅠ
레벨1 멘붕노예 (대학원생)
안녕하세요..
대학원생입니다..
현재 PCR을 이용해서 DNA증폭 후 전기영동을 했는데,,,
결과가 너무 들쭉날쭉해 고민입니다.
위의 사진은 같은 샘플(DNA가 존재하는 것으로 확인된 양성 샘플)을 전기영동 test 한 사진입니다.
모두 120bp쯤에서 밴드가 떠야 하는 양성 샘플입니다.
(* nested PCR 진행)
그런데, 1) 어떤 것은 잘 뜨고 어떤 것은 위에서 아래로 smear하게 보여서 무엇이 문제인지 알고 싶습니다.
심지어,, 2) 음성(가장 마지막 샘플/ N으로 표기) 샘플도 컨탐인지............
근데 nested PCR 에서는 너무 많은 cycle을 거쳤기 때문에 저렇게도 보인다고는 하던데,,,ㅠㅠ
gel이 문제 인가 싶어(* 현재 1.5% agrose gel 사용) 다시 만들어 실험해보았으나, 결과는 똑같았습니다.......ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ
고수님들,, 살려 주세요..
** smear 현상이 보이는 이유에 대해 알고 싶습니다.... 다양한 이유가 있다고는 하지만.... 부탁드립니다..
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