실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > Small RNA Analysis
shRNA Knock down effect
레벨1 Herseptin (대학원생)
안녕하세요 석사1차 재학중인 학생입니다.
최근에 pLKO.puro vector를 사용해서 shRNA가 cloning된 plasmid를 만들었는데 교수님께서 Infection하기전에 knock down effect가 나타나는지 확인하기 위해 293T cell에 PEI transfection 후 Western blot으로 확인해 보라고 하셨습니다. stable cell에 비해 효율은 떨어질 수 있지만 effect가 어느정도 보일것이라고 예상했던 것과는 반대로 endogenous protein level이 그렇게 떨어지지는 않더라구요.. target protein이랑 shRNA를 co-transfection했을때는 ptn level이 잘 떨어지는데 이거는 shRNA의 effect가 잘 안보이는 걸로 해석해야 하나요 아니면 transient transfection으로는 shRNA effect가 잘 안보이는 건가요???
제 위 선배들은 293T에서 PEI transfection으로 확인하고 stable cell만들어서 실험했다는데 저는 293T에서 effect가 안나타나서 클로닝만 반복입니다... 조언 남겨주시면 감사하겠습니다.
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