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96 well plate에서 배양 시 배지가 마르는 문제.. (대장균 배양)
레벨1 와글와글 (대학생)
안녕하세요, 실험하는 중에 막히는 것이 있어 이렇게 질문을 올립니다..
제가 하려고 하는 실험을 먼저 간단하게 설명드리자면,
96 well plate에 액체 배지를 200 uL씩 분주한 다음,
각 well에 대장균 콜로니를 접종하고,
배양과 동시에 enzyme 발현을 한 다음(단백질 발현에 필요한 물질들은 액체 배지에 미리 포함),
일정시간 후 centrifugation 하여 액체배지는 제거하고 남아있는 대장균 pellet을 이용하여 enzyme 반응을 시켜 screening을 하려고 합니다.
그런데 가장 처음 대장균을 배양하는 단계부터 삐걱거리고 있습니다...ㅠㅠ
1. 96 well plate에서 24시간 넘게 배양을 해야 하는데(온도는 28도 정도입니다), 그럴 경우 뚜껑을 닫아도 배지가 거의 말라서 균이 자라지 못합니다.
2. 그래서 위에 빈틈이 아예 없도록 위에 테이핑을 해보았는데요. 배지는 안 마르는데 여전히 균은 안 자랍니다..
(2번 문제점같은 경우에는 aeration 이 안 되어서 그러는 게 아닐까 싶은데, 차라 배지 volume을 절반으로 낮추는 게 나을까요?)
같은 부피(200 uL) 의 액체배지에 e tube에서 키웠을 때는 균이 잘 자라서 pellet도 어느 정도 보였는데, 96 well plate에서는 안 자라서 정말 고민입니다. ㅜㅜ
가짓수가 상당히 많아서 시간관계상(?) 무조건 96 well plate를 사용해야 하는지라 ..
96 well plate는 처음 사용해봐서 상식이 부족한 탓에 더욱 어려움을 겪고 있습니다 ㅠㅠ..
(사용한 제품은 새로 주문한 게 아니라 실험실에 오래 묵혀있던 것인데, 제품번호가 명시되어있지 않아 정보를 찾기가 어렵네요..ㅠㅠ 일단 제품 포장지 사진을 첨부하였습니다.. 박테리아 배양에는 코팅되어있지 않은 제품이 권장된다고 하는데, 혹시 제가 코팅되어있는 제품을 사용하고 있다면 그것이 원인일 수 있을까요?)
팁이 있으시다면, 도움 부탁드립니다. 읽어주셔서 감사합니다. ㅠㅠ
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