[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
https://www.ibric.org/myboard/list.php?Board=news&PARA3=54
스폰서배너광고 안내  배너1
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Buffer/Reagent
조회 4945  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Enzyme Activity 실험에서 Microsome preparation과정.
알이성규  |  2008.12.03 13:25
저는 liver에서 EROD와 cyP1A의 activity를 실험하려고 합니다.

비전공자라 모르는게 많아 조언 구합니다.

microsome preparation과정에서 대게 homogenization buffer와 resuspension buffer를 사용하여 microsome을 얻게 되는데 굳이 두 buffer로 나누지 않고 동일 buffer로
원심분리후 pellet를 재부유 및 균질화시켜 microsome을 얻으면 안되나요?
두 buffer의 차이는 글리세롤의 유무인데, 아니면 아예 buffer 조성에 문제가 있는지...조언 부탁드립니다.

아래는 제가 사용할 Microsome preparation의 과정입니다.
ㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡ
Materials
* Buffer A (Homogenization buffer)
: 0.154M KCl, 50mM Tris, 1mM DTT and 1mM EDTA (pH 7.4)
* Buffer B (Resuspension buffer)
: 0.154M KCl, 50mM Tris, 1mM EDTA, 1mM DTT and 20% Glycerol (pH 7.4)
Methods
1. Frozen stored liver tissue (~0.1g) was homogenized in 4 times volume of homogenization buffer using homogenizer.
2. Centrifuge the homogenate at 12000 g for 20 minutes in order to remove cell debris and mitochondria.
3. The supernatant is then centrifuged at 130000 g for 60 minutes to sediment the microsomes.
4. The pellet obtained is resuspended in 0.2ml resuspension buffer.
5. The protein content of the microsomal fraction is determined by Bradford method.
#microsome preparation
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알생물학실험초짜  |  2008.12.04   
Glycerol은 단백질의 stability와 storage를 위해 homogenizing 버퍼 또는 storage 버퍼에 사용됩니다.Homogenizing buffer의 경우에도 분획과정에서 세포의 섞임을 막기 위해 sucrose나 glycerol이 사용되기도합니다.

본 실험에서는 microsome (목적 단백질을 포함하는 부분) 의 안정성(활성이나 기능)을 위해 사용되는 것으로 보여집니다.
시료에서 획득되는 microsome이 적은 만큼 실험의 정확도를 위해서는 glycerol (또는 sucrose나 ethyleneglycerol)을 반드시 넣어주는것이 좋을듯 싶습니다.

세포 분획에서 sucrose가 첨가된 버퍼를 이용하여 균질화 한 경우 microsome 의 resuspension 버퍼에 sucrose를 넣어주기도 합니다만 대부분의 EROD실험에서는 glycerol을 이용하여 세포 분획을 하지않는 것으로 보여지네요. 아마 Tris-HCl (pH 7.4)을 이용해도 분획에는 영향을 미치지 않기 때문이 아닐까 싶습니다.
답변하기
할인행사 광고 검색광고
코람바이오텍 코람바이오텍
[OriGene] IHC Reagents, shRNA, CRISPR, Proteins, Lentivirus.. (4.27까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
Eppendorf New 25mL Conical Tubes : 혁신적인 디자인과 다양하고 편리한 사용 (4.1까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
βeta
5/6  좌우
625,100594,000
239,800228,000
71,30068,000
867,100824,000
225,200214,000
153,000145,000
691,800657,000
90,60086,000
272,300259,000
147,600140,000
140,100133,000
374,800356,000
404,600384,000
79,70076,000
199,100189,000
119,600114,000
102,30097,000
121,100115,000
316,000300,000
92,80088,000
522,300496,000
603,600573,000
158,400150,000
242,000230,000
최근등록   더보기 >
대장조직 해부(swiss roll 방식) 관련 질문이요..   02.23
knock out 마우스 국내보유 검색방법   02.23
3M petri dish를 사용한 미생물 측정 방법 (대장균, 일반세균용)   02.23
발효액 안에서 미생물 추출   02.22
손세정제를 소독용 에탄올 대신으로 써도 될까요?   02.22
Desoxycholate Lactose Agar 배지 색 변함   02.22
ImageJ mean gray value 질문입니다   02.22
단백질 농도 측정 시 계산 법   02.22
코로나19 같은 바이러스 관련 실험문의입니다!!(급합니다ㅜ)   02.22
세포가 오염돼서 죽은 거 같아요   02.21
에스엘에스바이오
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아