실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
EcoRI 와 SalI을 붙여 primer 제작시 dummy는 어떤 것이 좋나요?
레벨1 사과는애아뽀 (대학생)
클로닝을 하는데, 제한효소 사이트는 EcoRI와 SalI으로 하고 있습니다. 하도 ligation이 안되는 느낌이라 primer 확인해보니 바로 제한효소 시퀀스부터 시작하는 것을 확인하고서 enzyme site sequence의 5' 쪽에 dummy sequence를 붙여 다시 주문하려고 하는데 도움이 필요합니다...
1. EcoRI와 SalI는 각각 어떤 염기를 몇 개 붙여야 잘 잘리나요..? SalI의 경우 알려진 자료로는 뭘 붙여두 짧은 시간에는 잘 안잘리는 것 같은데, 혹시 경험적으로 어떤 것을 붙이셨을 때 잘 잘리셨는지 ㅠㅠ
2. 후에 pcr product를 enzyme cut 할 때 각각 처리하는 것이 좋을까요 한 번에 double cut하는 것이 좋을까요..?
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