실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
Ex TAKARA taq polymerase 사용 조언 부탁드립니다.
레벨5 핑핑이 (대학생)
저희 실험실에서는 주로 TAKARA Ex taq polymerase를 사용해서 PCR을
합니다. 그래서 관련된 설명서와 실험 방법 등을 찾아서 공부하던 도중 이해가
안되고 찾아도 잘 나오질 않아서 질문 드립니다.
1. TAKARA Ex taq polymerase 설명서를 봤을 때 dNTP는 200μM 농도로 사용
하는 것으로 보입니다. 제가 공부한 바로는 dNTP는 200μM당 1.5mM의
Mg2+이 일반적인 것으로 알고 있습니다. 그렇지만 Ex taq buffer에 들어
있는 Mg2+의 최종 mixture 농도를 계산해 보니 2mM의 농도가 나왔습니다.
이 차이가 PCR 에는 영향을 미치지 않을까요? 아니면 다른 이유가 있을까요?
2. 설명서에서 TAKARA Ex taq polymerase를 넣을 때 5U/㎕을 0.25㎕ 넣어
주길레 최종 polymerase의 농도를 계산해 보니 0.25㎕/50㎕ *5U해서 0.025U
가 나왔습니다. 1U은 1분당 1μmol의 기질을 전환 시킬 수 있는 효소의 양을
의미한다고 알고 있는데 그럼 이 polymerase가 전환 시키는 기질은 뭔지,
그 기질을 전환시키기에 충분한 양인 것인지 궁금합니다.
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