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DNA를 내리기 위한 native PAGE gel은 원래 홈이 제대로 안 생기나요?
레벨2 김민기96666 (대학원생)
안녕하세요.
EMSA를 위해 protocol을 optimize 중인 대학원생입니다.
다름이 아니라, 10 % native gel을 만드는 데 어려움을 겪고 있습니다.
현재 recipe는
Prepare 10% polyacrylamide gel (5개분. 25 mL)
|
Volume (mL) |
H2O |
13.9 |
10X TB |
1.25 |
30% acrylamide stock |
8.33 |
10% APS |
250 μL |
TEMED |
25 μL |
를 사용하고 있는데요,
보시다시피 제대로 loading이 되지 않습니다.
콥을 제거하고 난 뒤 홈이 깔끔하게 비어있지 않고, 미처 제거되지 않은 젤의 실(?) 같은 것들이 잔류하고 있습니다. 그래서 loading을 할 때도 그것들에 막혀서 깔끔하게 loading이 되지 않고요.
EMSA 결과는 아래에서 보시다시피 제대로 나오기는 합니다만..
제대로 loading이 안 되니 아무래도 신경이 쓰입니다.
DNA를 이용한 PAGE는 따로 stacking gel이 없는 것으로 알고 있는데요, 제가 제대로 알고 있는건가요?
어떻게 하면 콥을 제거할 때 홈이 깔끔하게 되도록 만들 수 있을까요?
조언 부탁드립니다ㅠㅠ 감사합니다
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