실험 Q&A Immunology > etc.
NO production assay 가 안나옵니다.ㅠㅠ
레벨1 목성인이다 (대학생)
안녕하세요 NO production assay로 인해 큰 어려움을 겪고 있는 석사과정생입니다.
다름이 아니라 잘 나오던 NO Production이 안나오니까 미치겟네요...
Intron 사의 NO Production kit 를 쓰고 있습니다. 실험 조건은 다음과 같습니다.
12 well 에 Raw 264.7 세포를 2x10^4/ml 분주하고 24시간 안정화 시킨뒤 H37Rv로 (결핵균) 10 MOI 를 감염시킨뒤 4시간후에 PBS로 2번 Washing하여 extracellular bacteria를 제거 합니다 이후 약물을 처리한 후 18 hr 24 hr 48 hr 뒤에 상층액을 얻어서 12000 rpm 5 min centrifuging 후 상층액만을 얻자마자
96 well에 100ul씩 처리하여 이후 data sheet 에 나와있는대로 no 생성량을 확인하는데.. 모든 그룹에서 배지가 (DMEM 10% FBS no P/S) 노란색을 변하고 분홍생 발색이 안됩니다.
스탠다드는 잘 잡히는데 샘플에서 NO 발생이 안되는 것 같아서 트러블 슈팅으로 5X10^4/ml 로 세포 양도 늘려보고 혹시나 해서 상층액을 3/1로 희석도 해봣는데.. 모든게 안잡히네요...........하...... 어떤 문제인지 조언 부탁드립니다. a미칠 것 같습니다...ㅠㅠ
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