실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > mRNA Analysis
Recombinant cytokine 처리 후 qPCR로 확인했을 때 mRNA 발현량이 차이가 나지 않는 이유가 무엇일까요?
레벨1 Cinnamon (대학원생)
안녕하세요, RT-qPCR 초보입니다ㅠㅠ
in vitro 실험으로 cell에 직접 recombinant cytokine을 처리한 후 qPCR을 진행했는데 control과 비교해서 처리군에서 아무런 mRNA 발현 변화가 없었습니다.
recombinant cytokine 처리 시간은 다른 실험을 통해 이미 working하기에 충분한 시간임을 확인하고 진행하였습니다.
RNA 농도 및 cDNA 농도 역시 nanodrop으로 확인을 하고 진행하였는데, RNA 농도와 cDNA 농도에는 문제가 없다고 생각했었습니다.
(RNA는 100 ng/uL, DNA는 1000 ng/mL 정도 였습니다. A260/A280 ratio는 RNA는 1.9, DNA는 1.8정도였습니다.)
RT-qPCR을 돌릴 땐 5X SYBR green 5uL, Primer 1 uL, DNA 1uL 씩 넣고 돌렸습니다.
혹시 이러한 경우를 경험하신 선배님들 있으실까요?ㅠㅠ
있으시다면 어떤 점이 문제였는지, 어떻게 해결하셨는지 경험에 대해 듣고싶습니다.
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