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Copper nanoparticle과 poly(thymine)을 이용한 형광 신호 측정 실험 재현성을 잡는 방법
레벨1 bcbd (대학생)
안녕하세요,
저는 현재 polythymine(poly T)이 있을 때 copper nanoparticle(CuNP)을 합성하여 형광 신호를 측정하는 실험을 하고 있는데요, 실험의 재현성이 좋지 않아서 조언을 구하고자 질문을 올리게 되었습니다.
CuNP를 합성할 때 사용하는 조건은 다음과 같습니다.
1. 10 mM MOPS, 150 mM NaCl, pH 7.6 solution
2. 10 mM CuSO4
3. 10 mM Sodium ascorbate
(관련 논문을 참고하여 설정한 조건입니다.)
위의 세 가지 물질을 poly T를 포함한 solution에 섞고, 어두운 곳에서 5분동안 상온 조건에서 incubation 시킨 후, UV-Vis 장비로 650 nm 부근의 emission spectra를 확인하는 실험을 진행하는 중에 있습니다.
문제는 실험 결과가 일정하지 않다는 점인데요, 어떨 때에는 650 nm에서 명확한 peak이 관찰될 때도 있는 반면, 같은 조건에서 어떨 때에는 아예 peak가 뜨지 않습니다. 오히려 peak이 뜨지 않는 경우가 더 많습니다. (3번 중 1번 정도 꼴로 신호가 뜨는 것 같습니다.)
제가 생각한 가능성이 있는 문제점들은 다음과 같습니다.
1. Buffer stock을 냉장 보관하지 않고 실온 보관하여 buffer stock에서 문제가 발생
2. CuNP를 합성하고 UV-Vis 장비 측정을 위한 plate에 옮기는 과정에서 시간이 길어지고 빛에 노출이 되는 시간이 길어져 문제가 발생 (CuNP 합성을 위한 mastermix를 만들어 poly T가 있는 solution에 분주한 다음, plate에 옮겨서 5분 incubation을 하고 형광 신호 측정을 하고 있습니다.)
3. CuNP mastermix (앞서 언급한 세 가지 solution의 mixture)를 만들 때 가끔 색 변화가 생기는 경우가 있는데, 색 변화가 생길 때만 형광 신호가 관찰되었던 것으로 기억합니다. 이 현상의 이유는 잘 모르겠으나, 경험상 그랬던 것으로 기억합니다. 혹시 이 현상에 대해서 잘 아시는 분이 있으면 설명 부탁드립니다 ㅠㅠ
이상 제가 언급한 세 가지의 케이스 중 정말로 실험의 재현성에 영향을 주는 문제가 있는지, 혹은 제가 생각하지 못한 다른 문제 때문에 실험이 잘 되지 않는 것인지 관련된 경험이 있는 분들의 조언 부탁드립니다! ㅠㅠ
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