실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > mRNA Analysis
rtPCR
레벨1 어뜨케 (대학원생)
마우스 폐조직을 가지고 2 step rtPCR(SYBR green)을 시작하고 있는데요
1ug RNA로 cDNA 20ul를 합성하고 40ul 더 넣어 희석해서 사용하고 있습니다.
PCR시 10uM primer는 각각 0.75ul, cDNA 2ul, total 10ul로 했는데 GAPDH가 22-25 cycle에 target이 37 cycle이후에 들쑥날쑥으로 뜹니다. (40 cycle안에 안뜨는 경우도 많고요)
전반적으로 늦게 뜬다는 조언이 있어서 cDNA와 primer양을 조금 늘려봤는데 그닥 큰 변화가 없습니다.
RNA ratio는 문제가 없어 보이는데...
주요 문제가 뭘까요?
고수님들 도와 주세요!!
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