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질문 mice로 MCAO 중입니다
올챙이=ㅅ=(과기인)  | 07.14 19:47
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안녕하세요, 10주령 c57bl/6J로 MCAO 중입니다.. MCAO 후 하루 뒤에 ICV injection을 해줘요.. 네.. 쥐들에게 데미지가 엄청 크죠.. MCAO나 ICV injection이나..

아무튼 이 찍찍이들을 수술 후 7일간 살려서 MRI를 찍어야 하는데요..

쥐가 너무 잘 죽습니다..

혹시 프로토콜 점검이나 살리기 위한 좋은 팁 있으면 조언 부탁드립니다..ㅠㅠ

 

다음은 저의 수술방법입니다.

* 수술 직전 마취된 상태에서 케토프로 진통제를 주사해줍니다. 말이나 소의 Recommand 용량만 나와있기에 참고해서 100g 당 3ul 들어가야하는 것으로 기준을 잡았습니다. 약물 원액을 100ul/10,000ul 로 희석한 뒤 마리당 56~76ul를 injection 해줍니다.. (이때도 한번 더 saline으로 희석해서 56~76ul/200ul 을 injection 합니다) 주사는 그냥 간편하게 목덜미에 피내주사 하고 있습니다.

* MCAO 수술시간은 절개에서부터 봉합까지 24분? 정도 걸립니다.

정말 빠르게 하면 17분까지 줄일 수 있고요. (그렇다는 말은 occlusion 까지 걸리는 시간은 15~21분이라는 의미입니다)

* doccol 실 602134 로 90min간 occlusion 후 reperfusion을 시켜줍니다.

* 수술 후 3시간 ~ 6시간은 heating pad에 올려두고요 (사실.. 사람용 작은 장판판을 따로 구비해두고 케이지를 그 위에 올린 뒤, 케이지 내부 온도를 34~38도로 맞추어둡니다)

* 수술 후 매일 4~7시간에 한번씩 들어가서 (보통 하루에 3번 들어가는 것 같아요) 체온이 떨어진 애들은 위의 heating pad나 열을 내는 램프를 통해 체온을 뎁혀주고요. 시간없을 때에는 20분 정도 밖에 못할 때도 있지만, 대개는 2시간 정도..? 체온이 올라갈 때까지 해줍니다.. 그렇게 체온을 올려놓으면 기력이 좀 회복되지만 거의 죽을 때즈음인?? POD5일즈음 되면 체온을 올려놓아도 스스로 체온을 회복하지 못하고 몸이 식습니다..(^^,, 그것때문에 일부러 밥도 든든히 주는데..하..)

*  위에서 만든 진통제를 수술 당일부터 3일동안 한번씩, 총 3번 주사해주고 있습니다. 보통 56~60ul 정도로 들어가는 것 같습니다. 항생제는 따로 사용하지 않고 있습니다.

* 경색이 온 애들은 대부분 스스로 식사도 못해 사료를 그라인딩하여 직접 섭취해주고 있습니다.하루에 두번 정도..? 위내투여는 해봤다가, 사료가 침전되고 액체속에서의 고체로 다시 뭉치는 경향이 있다보니 존대에 압력이 걸리더라고요, 그래서 쥐한테도 좀 많이 위험해서 그냥 주사기 바늘 빼고 마우스 입에다가만 흘려넣어주고 있습니다. 그렇게 하면 사료 농도도 진하게 해서 투여할 수 있어서 좋은 것 같습니다.

* 보통 이렇게 하면 POD4~5일까지는 대개 사는 것 같습니다. 생명을 거의 붙잡아놓는 수준인데.. 체중을 재어보니까 26g짜리 쥐가 POD5~6일에 14g~15g까지 빠집니다.. 경구투여까지 해주는데도요..

 

 

5마리 수술해서 POD1에 2마리 죽고, POD5 새벽에 1마리 죽고, POD6 새벽에 정말정말 아끼던 1마리가 죽었네요.. 하..^^,,

나머지 한마리는 POD1부터 그냥 엄청 건강해서 통통 뛰어다니고 이소룡처럼 마구 싸돌아댕기며 이것저것을 해보려는 쥐에요, 수술 전보다 끊임없이 손에 잡히는대로 먹어치워요.. 돼쥐.. 아 가끔 이런 쥐들이 있는데, 솔직히 놀랐어요, 수술전에 체중은 25g이라면 POD7에 쟀을때에 28g..? 다른 아픈 쥐들은 14,15,16g 인데.. 와우

 

아무튼 경색 왔다고 생각한 쥐들이 전부 죽어버려서 현타가 오네요..

이렇게까지 했는데 ..^^^.. 뭐를 잘못한걸까요..? 핳핳

경색이 잘와도 너무 잘와서 죽어버리네용

occlusion time 90분에서 더 줄이고 싶은데 저렇게 간신히 부여잡은 쥐들 데이터가 몇마리 이미 나와버려서 교수님이 허락 안해주실 것 같아용

뭐가 잘못된걸까,, 나는 최선을 다했는데 쥐들은 살려고 노오력을 안하네요

 

다른 분 말씀으로는 POD1에 많이 죽고 점차 쥐들이 시간지나면서 회복된다는데.. 저도 물론 POD1이 고비이기는 하지만 저는 점점 시간 지날수록 애들이 죽어가네요.. 하루가 다르게 체중도 마구 빠지고.. (심지어는 체중 잰지 4시간 뒤에 재봤을 때에도 순식간에 체중에 빠져있더라고요.. 하긴.. 하루만에 2~3g이 빠지는 애들인데요..실시간으로 빠지겠지..)

 

왜그럴까요?ㅠ 왜 저는 시간 지날수록 애들이 회복되고 살아나는게 아니라 죽어나갈까요? 경구투여를 너무 자주하면서 손타서 죽은걸까요, ㅠㅠ 체온 뎁히느라 heating pad에 자주 꺼내놓아서 그런 것일까요.. 항생제를 주지 않아서일까요..

그냥 냅둬야 하나,, 죽을 애들은 죽어랏 라는 심정으로..

 

도와주세요..ㅠㅠ.. 흑..

진짜 농담조로 저 놈들이 내 VIP 환자라고 하는데.. 그 VIP환자가 계속 죽어나가니 현타가 옵니다.. 정말 이렇게까지 해야하는 실험인걸까.. 아니면 다른 사람들은 이렇게까지 안해도 MCAO 잘만 하는데 나만 그런건가..? ㅠ 이런 생각들로 너무 우울해집니다..

#MCAO
 
#ICV injection
 
#살려야한다
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이=ㅅ=  |  07.14 20:25  

사진은 POD7까지 간신히 살려놓은 쥐 MRI사진입니다..

노오력에 노오력에 노오력에 노오력을 ... 저는 최선을 다했습니닷..ㅠㅠ..

저런 상태의 쥐는.. 그냥 미동도 없고요

Garsia 점수 최하점에 Rota-rod 점수는.. 뭐 볼 필요없습니다.

그냥 올려놓으면 떨어지는 수준..

체온을 혼자 유지할 기력도 없는 녀석..

지금까지 쥐들이 (몇마리 빼고) 저런 상태로 있어서 POD4,5,6 즈음에 죽네요..

솔직히 저렇게 살려두려고 거의 정말로 잠자는 시간 제외 24시간 수시로 들어가서 케어해야 했어요...ㅠㅠ.. 하도 붙박이처럼 있다보니까 동물실 눈치도 보이구요.. 히팅패드랑 이런거 보관하는 것 때문에 pass room을 개인공간처럼 사용하는 것처럼 보이는게 아닌가.. 하는 눈치도 많이보고요..

저도 공부하고 주말도 좀 제대로 보내고 싶은데.. 퇴근시간도 좀 지키고 싶은데..

아 저는 대학원생이 아닌 그냥 연구원입니다..ㅠㅠ,, 칼퇴를 꿈꾸는 직장인이란 말입니닷...

개구리Q.E.D.  |  07.16 00:05  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
저는 MCAO관련이 아니라 좀 다르지만
우선 뇌 수술을 했었기에 약물 정보를 남깁니다.

우선 전신마취인 호흡마취는 Isoflurane
수술 전 뇌 표면 국소마취는 Lidocine
그리고 수술 후 진통제와 염증을 잡는 목적으로
ketoprofen을 사용했습니다.

Ketoprofen의 경우는 원액을 1/100로 희석해서
Mice 5ml/kg
Rat의 경우 원액을 1/10희석해서 0.5ml/kg으로 투여했습니다.

호흡 마취를 하고 머리 표면 소독은
0.5% 알파헥시딘
(판매하는 5% 알파헥시딘을 70% ETOH로 1/10로 희석)
이후 국소마취가 들어갑니다.
수술시에 전신마취와 국소마취를 하지 않으면
동물이 스트레스를 많이 받고
그러면 모든 실험 결과가 좋지 않습니다.

이렇게 하고 힛팅패드는 37도
수술 후에는 온열램프에서 깨어날때까지
30분 정도 해 주는데 만약 이때 상태가 너무 안
좋은 경우는 손에 올려두고 램프를 쬐여주면
살아나는 경우가 있었습니다.
못 깨어나면 오래 해 주는게 좋지만
너무 과할 경우에는 마우스는 높아진 체온을
마우스 스스로 조절하기 어려워서
오히려 안 좋을 때도 있습니다.

약제들을 바꿀것을 추천합니다.
올챙이=ㅅ=  |  07.17 11:46  

감사합니다.. 한번 국소마취까지 진행해보겠습니다..!

heating ped 에 올려두는 시간도 줄여야겠네요.. 감사합니다.

개구리Q.E.D.  |  07.17 15:03  
첨부파일 파일첨부: Screenshot_20200717-153148_Adobe Acrobat.jpg (188 KB)
이미지 첨부파일
Lidocaine은 0.5% 알파헥시딘으로
(일반 소독액보다 소독과 보호 효과가 있음)
이어바에 고정한 쥐의 머리에
눈에 약제가 들어가지 않게 면봉으로 적셔서
머리털을 충분히 적신 후에 털을 다 제거하고
난 후 피하에 주사를 해 줍니다.
(이 때 제거된 털이 뇌에 안 들어가야 합니다.)

Ketoprofen은 뇌 수술 후 봉합을 하고 난 후
호흡 마취기기에서 이어바와 모든걸 제거하고
IP로 주사를 해 주고
(피하와 복강투여는 차이가 있으니 꼭 IP로 하세요)
무게를 측정 한 후 케이지에 넣고 온열 램프를 켜 줍니다.

그 후, 상태가 안 좋으면 ketoprofen을
다음날 더 놓아 주지만
더 놓지 않아도
위 과정대로 했을 시에 뇌 염증이나
동물이 죽은적은 없었습니다.

다만 뇌 수술시 털이 제대로 제거되지 않을경우
염증이 올라와서 쥐에게 안 좋을 수 있으니
수술때 털을 제대로 제거하고 안에 남지 않게
하는것도 매우 중요합니다.

그럼, 좋은 결과 얻으세요!
지나가다  |  07.20 23:48   

음...

 

히팅 패드를 안쓰는 것을 추천드립니다.뇌졸중 치료 방법 중 하나가 저체온을 유지하는 방법도 있습니다.

이걸 반대로 생각해보시면 될 것 같고 일단 기타 다른 분들보다 히팅 패드 쓰는 시간이 길어 보이네요.

올챙이=ㅅ=  |  07.23 02:49  

모두 답변 감사합니다!

 

교수님과 상의 후 occlusion time을 90분에서 60분으로 줄였습니다.

리도카인은 아직 못써보았습니다.

히팅패드는 쓰지 않고 적외선 램프로 10분~30분 정도? 뎁혀주는 것으로 대체했습니다.

 

쥐들 상태가 너무 좋네요^^ 8마리 중 7마리 생존입니다.

죽은 한마리는 POD5일에 사망했네요 ㅎㅎ 처음부터 상태가 너무 좋지 않았던 쥐였어서 생존한게 기적이었습니다 ^^

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