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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 PCR 밴드가 다른 사람이 해도 안 나올 때.
개구리동물연구(과기인)  | 07.14 15:35
첨부파일 파일첨부: PCR 밴드.jpg (225 KB)
이미지 첨부파일

upload_image

Sarm1이라는 블랙 마우스를 지노타이핑 하고 있습니다.

밴드가 나오질 않아 다른 스텝이 했는데도 나오질 않고 있어서

다음그룹을 했는데도 나오지 않아서 다른 방법으로 진행 중 입니다.

DDW 548ul, buffer 80ul, dNTP 80ul, Taq 40ul, 프라이머 4ul X 3개

DNA 1ul, Mix 19ul  얼음 위에서 진행 하였고, WT 컨트롤로 총 37개

샘플입니다. 또 실패하면 뭐가 원인일 까요?  

#PCR밴드
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  07.14 18:19  

PCR 실패의 원인은 너무 많아서 한번에 해결하기가 어렵습니다.

무엇보다도 positive control이 안나오면 답을 구할 수가 없어요.

반드시 PCR 밴드가 나오는 positive control을 확보해서 실험해 보세요. 그래도 안나오면ㅁ primer가 온전한지 3% agarose gel에 걸어서 확인해 보세요.

개구리동물연구  |  07.14 21:06  
프라이머는 어제 새것 개봉 했구요. 겔은 2%만 씁니다.
개구리금상품권  |  07.15 22:15  

Primer에 사용한 buffer는 어떤걸 사용하셨나요?

TE? DDW?

 

Genotyping lysis buffer는 어떻게 사용을 하셨나요?

 

gel 사진에 smear를 봤을때, 

contamination이 많이 의심됩니다. 

 

제 일터에서도 갑자기 저런 상황이 발생했었고, 

확인해 보니, 학생이 primer 희석 부터 많은 부분에서 

오류가 있었더군요... 1달이나 걸려서 다시 바로 잡았는데... 

 

처음부터 모든걸 의심하고, 

처음부터 전부 새로이 하는게 가장 빠른 방법일 수도 있음을 추천드립니다

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