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현재 cloning하려는 사이즈가 어떻게 되나요?
F, R oligo를 상보적으로 주분해서 동일 몰농도로 혼합 후 93도에서 3분, 실온으로
내리면 자연적으로 ds oligo가 만들어 집니다.
cloning은 우선 vector와 insert를 잘 준비해야 하기 때문에 다시 한번 점검해
보세요.
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레벨4
초보석사쌤
(대학생)
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20.07.14 13:50
duplex로 주문을 해도 93도에서 5분 후 실온에서 식게 놔두어야 하나요?
vector의 크기는 5427bp 입니다.
insert를 duplex로 주문한 oligo를 쓰려고 합니다.
oligo는 71mer라고 되어있습니다 ㅠㅠ
duplex는 바로 사용하면 됩니다.
insert가 cloning된 것은 어떻게 확인하나요?
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레벨4
초보석사쌤
(대학생)
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20.07.14 15:33
single cut해서 size로 확인합니다.
하지만 insert양이 너무 짧은 범위여서 우선 sequencing으로 하고 있습니다.
같은 몰수 라고 하셨는데 그럼 원래 100pmol로 오는 oligo를 1ul넣고 99의 DW로 하면 10pmol로 해서 cloning해도 되나요?
너무 짧아서 전기영동에서 확인이 쉽지 않을 것 같습니다.
같은 몰로 반응시킬 때 cloning은 무게 단위로 계산해서 하면됩니다.