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질문 ELISA Ab 질문이요!!!!
올챙이Vind(일반인)  | 07.13 16:17

안녕하세요 GAPDH ELISA 진행하려고 하는데 Ab관련해서 질문드립니다.

 

primary, secondary Ab 선택할려고 하는데 차이점이 무엇인지 궁금해서요.

upload_image

일단 저희가 보려는 GAPDH가 박테리아 유래라서 primary Ab는 이 제품을 사용하려고 하는데 Secondary Ab가 호환되는 제품이

upload_image

이 제품이라고 해서요..

 

전에 OVA로 실험할때 secondary를 Fc_HRP로 사용했던 기억이 있어서 이번에도 

upload_image

 

Fc-HRP 인 이제품을 이용하려고 하는데 이제품은 위의 primary Ab랑 호환이 안되는걸까요??

 

궁금한 것을 정리해보자면

 

1. Anti-GAPDH antibody [GA1R] - Loading Control (ab125247)를 primary Ab로 이용했을때 Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) (ab205719) 와 Goat Anti-Mouse IgG Fc (HRP) (ab97265) 둘다 호환이 가능한가?

 

2. 두가지 2nd Ab로 사용한 결과에서 차이가 있는가?

 

3. Goat Anti-Mouse IgG Fc (HRP) (ab97265) 가 GAPDH에 결합한 primary Ab만 인식하는게 맞는가?

 

세개정도 답변부탁드립니다!!!

#ELISA
 
#immunology
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이Nmhyk  |  07.13 16:41  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. Anti-GAPDH antibody [GA1R] - Loading Control (ab125247)를 primary Ab로 이용했을때 Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) (ab205719) 와 Goat Anti-Mouse IgG Fc (HRP) (ab97265) 둘다 호환이 가능한가?

Ans) 둘다 사용가능합니다. ab205719와 ab97265 둘다 mouse 유래 antibody를 잡을 수 있는 secondary antibody입니다.

 

2. 두가지 2nd Ab로 사용한 결과에서 차이가 있는가?

Ans) ELISA에서 두 antibody가 non-specific binding이 없다는 전제하에 signal intensity 차이가 약간 있을 수 있지만 결과차이는 거의 없을 것 같습니다. 

 

3. Goat Anti-Mouse IgG Fc (HRP) (ab97265) 가 GAPDH에 결합한 primary Ab만 인식하는게 맞는가?

Ans) Goat Anti-Mouse IgG Fc (HRP) (ab97265)는 Mouse IgG-Fc를 인식하는 antibody 이므로 mouse 유래 antibody (IgG)는 다 잡을 수 있습니다. Fc region을 제외하고는 specificity가 없기 떄문에 GAPDH에 결합한 primary Ab만 인식하는게 이론상으론 맞습니다.

 

올챙이Vind  |  07.13 17:53  

감사합니다!! 

Wonderer  |  07.16 17:48   

Secondary Ab를 고를 때는 주로 분석하게될 샘플의 농도 범위에서 선형성(linearity)이 가장 잘 확보되는 것을 고르는 것이 좋습니다. 다시 말해, 분석의 sensitivity에 차이에 따라 정량값의 차이가 있을 수 있습니다. 좋은 2차항체를 찾은 후에는 실험자의 오차, human error를 줄여야 좋은 결과를 얻습니다. 시료와 분석범위, 허용오차에 알맞는 항체를 찾으시기 바랍니다.

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