실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Library
Vector Library를 만들기 위해서 cDNA 양 말단에 특정 sequence를 삽입하고 싶습니다.
레벨1 정도라 (대학원생)
안녕하세요. 대충 미궁의 늪 언저리에 서식하는 대학원생입니다.
제목 그대로, Vector Library를 만들기 위해서 cdna 양 말단에 특정 sequence(enzyme site)를 삽입하여 합성하려고 합니다.
3' 끝에는 oligo dT 끝에 원하는 sequence를 삽입하면 될 것 같은데, 5' 말단에 어떤 방법으로 넣을 수 있을지 조언을 구하고 싶습니다.
일단 고려하고 있는 방법은 Reverse transcriptase가 5' 말단에 다다랐을 때 ccc를 달아준다니까 adaptor-ggg (대문자로 안써지네요ㅜㅜ) oligomer를 사용하는 방법인데, 이게 적합한 방법인지, 만약 이렇게 한다면 저 oligomer를 oligo dT primer랑 RT랑 같은 step에서 넣어주면 되는건지도 헷갈립니다.
혹시 cdna 5' end에 adaptor 삽입에 대해 알고 계신 것이나 경험이 있으시다면 대충 조각이라도 던져주시면 감사하겠습니다.
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