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질문 akta fplc 사용해보신 분 계실까요?
뒷다리해징(대학원생)  | 07.12 02:19

안녕하세요. 단백질 정제를 실험실에서 혼자 하는 학생입니다ㅠ

실험실에 AKTA prime 이라는 기계가 있어서 교수님이 이용해서 단백질 정제를 하라고 하셨는데요..

지금 sample 로딩하는 부분에서 의문이 들어서 질문드립니다!

load 모드와 injection 모드의 차이때문인데요

load 모드는 sample loop에 샘플을 담아놓는 것?이고

injection은 바로 컬럼으로 들어가게 하는 것이 맞나요?

저희 실험실 것이 5 ml 짜리 sample loop인데 제가 로딩하고 싶은 샘플이 50 ml 이면 그냥 injection 모드로 해놓고 계속 로딩하면 되는 걸까요..?

제가 기계치라서 이해하는데 너무 어려움을 겪고 있습니다 ㅠ

사용해보신 고수님들 도와주세요!!

#단백질
 
#AKTA
 
#정제
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  07.12 10:45  

AKTA 장비에 대하여 사전에 공부를조금 해야 합니다.

어떤 컬럼을 사용하는지도 중요합니다.

sample loop 이상의 시료는 loading하지 못합니다.

밖으로 다 버려집니다.

50ml loading할수는 없고 하려면 다른 부품이 필요합니다.

그러나 그정도 loadng할 필요는 없고 컬럼도 크기가 되어야 50ml loading이

가능합니다.

그냥 loading하고 싶다고 loading하느것이 아니라 여러가지 제반사항이

맞는지를 우선 확인한 후 정제 계획을 세워야합니다.

컴퓨터와 연결되어 있으면 컬럼에 맞는 정제 flow도 만들어야 합니다.

shinjung04@hanmail.net  |  07.12 10:58   

sample 50ml  loading 하시고자 하면 sample loop 를 그이상loop을

바꾸어야하며 ,만약5ml loop 을 사용하시면 5ml loading이상 하면 나머지

는 waste로 빠져나갑니다,

순서는 sample loading 하고 inject위치로 돌리면됩니다

(참고로 50ml loop 가격은 10-20만원 정도일것입니다)

MEMT  |  07.13 04:53   

load: 사용자가, syringe 를 이용하여 sample loop 에 sample 을 'load'. 

injection: AKTA 기계가, pressure 를 주어서 sample loop 에 담긴 sample 을 밀어내어 column 으로 'injection'. 그래서 사용자의 syringe 와 sample loop 가 disconnect 되어 있기 때문에 사용자가 sample 을 밀어넣어 줄 수 없음. 억지로 밀면 sample 을 잃어버리게 됨.

50ml sample 은 농축하여 (Amicon 이라든지) 5 ml 로 부피를 줄인 후에 AKTA 에 load 합니다. loading sample 부피가 50 mL 이 되면 정제 시 resolution 이 떨어지게 됩니다. 농축 과정에서 침전이 생성될 수 있으므로 농축 후 spin down 한 번 해서 supernatant 만 뽑아서 load 하면 좋습니다. 

 

 

올챙이Nmhyk  |  07.13 12:02  

안녕하세요

 

우선 sample 50 ml을 column에 loading 하신다는 것은 Gel filtration 목적이 아니라 ion exchange chromatography를 사용하는 거죠?

Ion exchange chromatography를 사용하실 경우에는 sample을 sample loop에 넣어서 column에 injection 하는 것이 아닌 pump에 물려서 loading해도 괜찮습니다.

 

그리고 만약 sample loop를 사용하고자 하신다면, load 모드에서 sample을 sample loop에 loading 해주시고 injection 모드로 바꿔서 column으로 sample을 넣어줍니다. 그 후 pause 및 load 모드로 바꾸신 후 다시 위 과정을 반복해주시면 됩니다. 물론 이렇게 실험을 진행하시면 어느정도 loss가 생기지만 가능한 방법이긴 합니다. 다만 injection 모드에서는 절대로 주사기로 sample loop에 sample을 넣으시면 안됩니다. 

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