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- vector와 insert를 몇 ug씩 사용하나요?
- TA cloning은 kit를 사용하나요?
- CP cell의 TF 효율은 확인했나요?
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레벨2
jjh103
(대학생)
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20.07.09 23:06
T4 DNA ligase 1ul buffer 1ul pGMT-easy 1ul insert 7ul넣었습니다
CP cell은 HIT CP cell 이용하였습니다
insert증폭에 Taq pol.을 사용했나요?
insert 부피는 중요한것이 아니고 양이 중요합니다.
예전에 몇번 이 kit를 사용해 봤는데 vector 2ul를 사용하여 한번에 cloning 가능한
kit입니다.
1ul vector로는 colony가 몇개 나오지 않았습니다.
이 kit는 실온에서 1시간 ligation 후 TF하는 것이 결과가 잘 나왔고 CP cell 보관
상태와 구매한 시점은 괜찮은 상태인가요?
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레벨2
jjh103
(대학생)
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20.07.09 23:39
insert 증폭에 lamp taq을 이용하였습니다 cp cell은 프리져에서 보관중이며 기간또한 얼마 되지않았습니다! insert 농도는 어느정도가 적당할까여? 크기가 2kb라 다소 큰것같아서 이점도 신경쓰입니다!
2kb는 이 T vector에 문제없이 들어갑니다.
Vector 농도를 감안하면 insert양은 0.2~0.3ug 이면
충분할것 같습니다.
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레벨2
jjh103
(대학생)
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20.07.10 09:50
감사합니다!