실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
his-tag 정제 후 단백질 농축 질문드립니다!
레벨5 해징 (대학원생)
안녕하세요. 단백질 정제를 처음 해보는 학생입니다.
his-tag 정제(elution 30 ml) 후 PBS(pH7.4)로 dialysis하였습니다.
이제 농축 후 활성 체크를 하려고 하는데...
제 단백질 사이즈는 162kDa 이여서 100k짜리 amicon을 이용하여 농축을 진행하려고 합니다.
이 과정에서 여러 궁금증이 생겨 질문 드립니다.
Q1. amicon을 이용하여 농축시 그냥 투석한 단백질을 로딩해서 원심분리하면 끝나는걸까요??
Q2. 그러면 막에 붙어있는 단백질은 없나요..? loss가 생길 거 같아서요.. 양이 3.9 mg밖에 안 돼서요 ㅠ
Q3. 이렇게 농축한 단백질은 활성 체크때 희석해서 사용하는건가요? ( PBS or 효소반응시 사용하는 버퍼 둘 중 어떤 것에 희석해서 사용하는걸까요? 활성체크, 온도별, pH별 특성 평가 하려고 합니다!!)
너무 간단한 질문들이라면 죄송합니다 ㅠ 신생 실험실이라 여쭤볼 분이 마땅치가 않습니다 .. 친절하게 답변해주시면 정말 큰 도움이 될 거 같습니다 감사합니다!!
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