실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
pCR8/GW/TOPO vector cloning
레벨2 실험실뵹아리 (과기인)
안녕하세요~ 실험실뵹아리입니다
GW topo vector에 유전자 클로닝을 진행중인데요
2틀 전에 vector에 target gene을 클로닝해서 OneShot TOP10 C.P cell 형질전환하여 LB spect100 고체 배지에 110ul, 80ul, 60ul씩 도말하였습니다. 어제 확인했을 때 colony가 총 5개 형성되었고 dotting한 뒤 오늘 colony PCR을 했는데 전기영동으로 확인한 결과 band가 나타나지 않았습니다.
TOPO reaction(vector에 유전자 클로닝한 mixture)를 -20ºC 냉동실이 아니라 4ºC 냉장고에 stock해두었습니다. 다시 C.P cell에 형질전환시키려고하는데 영향이 클지 걱정됩니다.
선생님들께서 문제가 있다고 생각하시면 조언부탁드립니다.
열심히 배우겠습니다~!
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