실험 Q&A Microbiology > Bacteria
DNA 추출
레벨4 지민쨩 (대학생)
PCR을 위해 E. coli 의 DNA을 추출하여 실험하고자 합니다.
처음에 실험을 했던 방법은 D.W. 400 uL에 colony를 2-3개 푼 후 105 ℃에 10분간 가열해준 후 원심분리하여 상층액을 DNA template로 사용하여 PCR을 했습니다.
혹시 이 방법에 문제가 있다면 어떤 문제가 있을까요...?
그리고 conventional PCR을 통해 저희가 추출한 DNA의 증폭 정도를 nanodrop을 통해 확인하고자 합니다.
따라서 실험계획을
1. 107, 108, 109 CUF/mL 농도를 맞춘 균을 위의 방법을 통해 상층액 얻음
2. nanodrop을 통해 PCR 전의 농도를 측정
3. PCR후 농도를 측정
하여 비교하고자 합니다.
이럴경우 각각의 농도의 균을 사용하였을때 추출되는 DNA의 농도는 어느정도이며, PCR로 증폭하였을때의 DNA의 농도는 대략 어느정도가 일반적인 것일지 알 수 있을까요..?
또한 PCR을 위해 들어간 시약과 물질들로 인해 DNA의 농도를 확인하는데 방해가 될까요?
그외에도 kit 말고 간단한 DNA 추출 방법이 있다면 추천바랍니다.
(PCI방법을 통해서도 해보았는데, 시간이 소요가 커서 다른 방법을 고려 중입니다.)
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