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질문 qRT-PCR Ct 값 질문드립니당!
알PCRCP(대학생)  | 07.08 00:57
같은 cDNA샘플에서 돌린 결과인데도 첫번째 결과에서는 18, 두번째 결과에서는 21 이런식으로 Ct 값이 크게 차이나는 이유가 무엇일까요??
차이나는 이유를 알아보기 위해서 96well 두개를 놓고 동시에 똑같이 처리하여 96well 하나는 running 시키고, 나머지 하나는 -20도에서 stock해놓은 다음 돌렸습니다.
qRT-PCR 온도조건이나 샘플이나 다를게 하나없는데... 반복해서 돌릴때마다 GAPDH Ct 값과 Target gene Ct 값이 차이가 나는게 신기합니다.
결과적으로 Ct 값으로 계산한 Copy No.에는 차이가 없지만 ( House keeping gene, target gene 모두 동일하게 올라가거나 내려가기 때문) 자꾸 이런식으로 나오는게 이해가 잘 가지 않아서 질문 드립니다!... 단순히 저의 핸들링 문제일까요...
#real time PCR
 
#Ct
 
#GAPDH
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
알마이코라  |  07.08 10:07  

동결보존성분을 추가한 PCR mix라면 냉동보관해서 사용하는 경우가 있지만, 일반적인 qPCR mix는 1X로 만든 상태로 얼려서 보관하면 활성이 떨어집니다. 

그것이 모든 유전자 target에서 Ct가 줄어든 이유입니다. 

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