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레벨5
BlackSmile
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20.07.07 18:10
1. Transfer 과정에 기포가 끼이는 거는 기포 방지를 위해서 western blot용 roller를 구매하여 사용하는 것이 가장 좋은 방법이긴 합니다.
Roller를 구매하는 게 힘들다면 filter paper랑 gel, NC membrane을 겹칠때마다 plastic 재질의 납작한 도구같은 걸로 옆으로 밀면서 기포를 제거해주는 게 좋습니다.
2. MTT를 찍어봐야 한다는 말은 drug를 처리했을 때 cell viability에 어느정도 영향을 준다는 말인지요?
사용하는 Drug가 cell proliferation이나 cytotoxicity에 어느정도 영향을 준다면 실험을 반복하였을 때 Drug가 제대로 cell에 작용하였다는 것을 MTT assay로 확인을 하고 western을 진행하는게 좋습니다.
"일단 western을 진행했는데 나중에 알고봤더니 drug가 제대로 작용하지 않았더라" 라는 불상사를 예방하기 위해서 MTT부터 찍는게 좋을 것 같습니다.
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레벨1
아에잉옹
(대학생)
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20.07.07 18:22
답변 정말 감사합니다,,ㅎㅎ
죄송하지만 하나만 더 질문하겠습니다,,
그러면 이전에 sampling해서 나온 western 결과와 이번에 다시 cell을 sampling해서 나온 결과를 같이 사용하면 안되는거죠?? 그전 결과는 없애고 다시한 cell line의 결과만 사용하는것이 맞는거겠죠??
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레벨5
BlackSmile
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20.07.07 18:29
아무래도 재실험을 진행한다면 그 data만 사용하는 것을 추천하지만,
우선 동일한 실험조건에서 western을 진행해서 얻은 data가 있다면, 반복실험을 통해 단백질 발현의 pattern이 동일하게 나타나는지 확인을 하는 게 좋습니다.
만약 동일한 결과가 나타난다면 예전 결과와 이번 결과 중 어느 data를 사용해도 문제가 되지는 않을 것 같습니다.