실험Q&A를 통해 여러분의 지식을 나누어 주세요. 답변을 등록하시려면 로그인 해주세요.
본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
Stem cell로 FACS 해본 적은 없지만
일반적인 경우
1. 훨씬 적은 수여도 상관 없습니다.
2. FACS 실험 직전에 하는게 좋습니다.
3. Buffer volume에 따라 틀리며 머신에서 속도 조절 가능합니다. Sorting의 경우 보통 한 샘플이면 넉넉잡아 10분에서 30분 정도 걸립니다. Sorting은 직접 하시는 건가요? 보통 초보자면 당연히 처음엔 숙련자한테 배우셔야 할 겁니다.
4. FBS 안 넣어주면 FACS 이후 생존률이 많이 떨어집니다. Staining시 Blocking효과도 어느 정도 있구요
-
레벨5
Arkadis
(대학생)
-
20.07.06 15:21
1X107cell/mL에 Ab 가 1X106cell당 20uL씩 쓰이는데 volume이 꽤 됩니다.
오늘 2계대째 해서 4개의 T-75 flask에 키우는데 2일뒤에 그대로 harvest해서 사용할 예정이라...
예상으로는 1X107cell/mL로 맞췄을 때 많으면 10mL정도 나오지 않을까 싶은데요...
저것보다 높은 cell농도에서 돌려도 상관이 없나요?
-
레벨1
해브어굿타임
-
20.07.06 16:32
저 같은 경우는 apoptosis/necrosis 비율을 확인하고자 FACS를 의뢰했었는데
kit에 적힌 protocol대로 cell 수 맞춰서 가져가니
분석해주시는 선생님께서 cell 수가 부족하다고 하셨었어요..
그래서 3배 정도 더 cell을 가져다가 FACS 찍으니 결과가 깔끔하게 나오더라구요ㅎㅎ
사용할 Flow cytometer에서 권장하는 농도 이상으로 높히지 않는게 좋습니다.
Manual 확인해보세요
또 너무 농도가 높으면 strainer 써도 기계 안의 튜브가 막힐 수도 있고,
과도하게 뭉치거나 간격이 과밀해서 singlet으로 해석이 잘 안될 수도 있습니다.
Sorting 돌려주시는 테크니션이 있다면 상담해보세요.