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질문 안녕하세요. mouse T cell activation 관련 질문드립니다.
알고속승강기(대학원생)  | 07.04 11:33

안녕하세요. 석사과정 중인 대학원생입니다.

저는 특정 protein KO mouse spleen에서 t cell을 isolation하고, 이를 soluble anti-cd3 antibody를 이용해 stimulation하여

초기 signaling을 보는 실험을 하고 있습니다.

사용하고 있는 anti-cd3 antibody는 Purified Hamster Anti-Mouse CD3e (BD, 553058)이고,

E-tube에 cell을 FBS가 없는 RPMI로 resuspension시킨 뒤, ice에서 soluble anti-cd3를 5ug/ml로 처리하여 20min incubation시키고 anti-mouse IgG를 10ug/ml를 처리하여 cross-linking 시킵니다. 그리고 37도 heatblock에서 5min stimulation을 진행합니다.

이 과정에서 anti-mouse IgG를 처리하여 cross-linking 시키는 것이 어떤 의미를 가지는지 이해를 못하겠습니다.

논문도 찾아보고, 주변 사람들한테 물어보기도 했는데 정확하게 알 수가 없어서

여기에 질문을 올려봅니다.

t cell activation을 하는데, 왜 anti-cd3와 anti-mouse IgG를 함께 처리하여 cross-linking을 시키는 건가요? 찾아 본 논문들에서는 이런 식으로 cross-linking을 시키는게 더 반응이 잘 일어난다고 되어있던데, 어떤 방식으로 이루어지는지 알고 싶습니다.

부족한 지식이 탄로나는 것 같아서 질문을 올릴지말지 고민을 많이 했는데, 실험에 이해하지 못하는 부분이 있다는게 너무 맘에 걸려서 질문드립니다ㅜㅜㅜㅜ 조금이라도 알고 계신게 있으시면 답변남겨주세요!!!!

감사합니다.

#t cell activation
 
#soluble anti-cd3
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