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질문 cell count 고수님들 도와주세요...
알kaldose(대학생)  | 07.03 15:48

안녕하세요.. 세포 실험을 배우고 있는 학생입니다

헤마사이토미터로 셀카운트를 진행하였는데 구석의 큰 4개의 사각형을 셌더니 총 세포수는 260개 였습니다.

 

트립신 처리후 배지를 첨가하여 원심분리를 해주었고 이후에 상층액을 제거하고 배지 2 mL로 세포 펠렛을 풀어준 후 10 uL를 취하여 셀카운트를 진행하였습니다. 이때 희석배수는 어떻게 곱해주어야 하는 건지..

 

또 전의 실험방에서는 헤마사이토미터에 커버글라스를 올려놓고 움직이지 않게 손가락으로 끝을 살짝 눌러 고정한 후 100 uL를 주입해서 커버글라스가 움직이면 다시 세척하고 처음부터 주입했는데 이번에 들어온 실험방은 흔들려도 상관없이 그냥 세시더라고요... 혼란이 옵니다.

1. 셀카운트에서 용액 주입시 커버글라스가 흔들려도 상관 없는건지

2. 꼭 10 uL를 취해서 넣어야 하는 것인지

3. 부피가 달라지면 카운트한 세포 값도 다르게 계산해야하는지 궁급합니다...

4. 그리고 꼭 셀카운트 시 원심분리를 해야하는 이유도 궁금합니다.

#cell count
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
12345  |  07.03 15:56   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. 흔들리면 안되지만, 현미경상으로 봤을때 정상이면 상관 없습니다.

 

2. 네

 

3. 카운트는 그대로 하되, 희석배수가 달라지겠죠

 

4. 어느 scale 로 셀을 키우는지 모르겠지만, 트립신+배지 하면 부피가 너무 크고 트립신을 제거해야 하는 필요성도 있기때문에 원심분리 합니다

알kaldose  |  07.03 16:26  

혹시 꼭 10ul를 사용하여야 하는 이유가 있나요?

또 위와 같이 원심분리 후 상층액을 제거한 펠렛을 2 mL 배지로 풀어 10ul를 취했을때 희석배수가 어떻게 되는지 궁급합니다...

알글씨야  |  07.08 11:27  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

몇 μL를 넣던 칸 안에 들어가는 부피는 정해져 있기 때문에 달라져도 크게 상관은 없을겁니다.
다만, 거기서 더 많은 양을 주입하게 되면 새어 나오기 쉽고, 적은 양을 넣게되면 골고루 펴지지 않을거에요.
(다른 양으로 주입 후 카운팅하여 확인해보는 것도 좋을 것 같네요)

희석배수는 1입니다.
여기서 희석 배수는 cell을 몇 mL에 풀었느냐가 아니라, 풀었는 세포현탁액을 카운팅하기 위해서 따로 희석하였나의 문제입니다.

부피가 달라지면 카운팅되는 cell 수가 이미 달라집니다.


저도 학부생 때 처음 세포배양 시, 희석배수가 이해가 안가 고민했던 기억이 나서 답변달아요.

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