실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Purification/Isolation
RNA isolation 실험준비중 질문이 있습니다.
레벨2 dmgk (대학생)
안녕하세요 연구실에서 공부하고 있는 초보학부실험생입니다. RNA isolation실험을 하기 위해 여러 이론공부를 하던 중 궁금한점이 생겼습니다. 저희실험실에 사용하는 kit에는 산성인 페놀이 존재하는데요 1. 자료를 찾아본결과 어떤곳에서는 페놀이 산성인 이유로 인해 크기가 큰 DNA는 변성되나 크기가 상대적으로 작은 RNA는 파괴되지 않는다고 하였고 어떤곳에서는 단백질,DNA,RNA 모든것이 산에서 변성된다고 합니다. 저의 생각에는 단백질,DNA,RNA가 모두 변성되나 RNA의 변성이 좀 덜하다고 생각하는데 맞나요? 2. 여러자료를 찾아보았지만 클로로폼 처리하고 3개의 층이 분리되었을 때 맨 위층에 RNA가 있다는 것은 이해가되지만 나머지 아래 두층에 관해서는 여러말이 있어 많이 혼란이 옵니다. 어떤곳에서는 맨 밑에층에 ripid, protein , 중간층에 choloform과 변성된 DNA가 위치한다고 하는데 다른곳에서는 변성된 DNA는 맨밑 유기용매층으로 가고 단백질은 변성이되어도 유기용매에 녹지않아 중간층에 모이게 되고 맨위 수층에는 RNA가 남게된다고 합니다. 또 선배한테 배우기로는 3개 층을 볼때 맨아래층이 chloroform층, 그리고 중간층에 있는것은 변성된 단백질과 DNA 층이라고 들었습니다. 정확히 맨밑에층과 가운데층은 무엇이 위치하는걸까요? 실험하는데 필요없는 질문들이기는 하나 초보실험자라 이론을 충분히 공부하고 확인을 받아야 하는 입장이기도 하고 너무 궁금해서 질문올립니다. 답변 부탁드려요
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