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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 지노 타이핑 PCR밴드 안 나올 때.
개구리동물연구(과기인)  | 07.02 18:39
PCR일 하면 밴드가 나오는 위치에 따라 판독해야 하는데 매번 할 때 마다 판독이 안 될 만큼 지독하게
안 나옵니다. 버퍼도 시약도 오래 된 것 같아서
새로 만들고 했는데요.

DNA 샘플 4ul ?썼는데요. 더 늘려야 할지 아니면
2ul만 써야 하는지..

2%겔 쓰는데요..

가운데는 흔적도 없고. 마커만 보이고 앞 부분과 뒷 부분은 하얗게 흔적만 있네요.

너무 스트레스 심하네요.
#PCR
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리금상품권  |  07.02 21:38  

꼬리에서 하시나요?? 어디든 조직에서 genomic DNA를 추출했을 경우, 

 

Genomic DNA extraction 후 농도를 측정해 보세요. 

 

오히려 더 높은 농도에서 PCR 반응이 안될 수 있습니다. 

하얀 부분은 genomic DNA가 많아서 끌린 것일 수도 있습니다. 

 

적정 DNA reaction 농도를 maximum 50ng-100ng으로 제조사들이 말하고 있으며, 

MgCl2를 0.5 -1mM 높이기도 합니다. 

 

 

개구리동물연구  |  07.04 22:29  
꼬리에서 체취하구요. 농도 측정은 하지 않습니다
ㅁㅇㄹ  |  07.05 12:50   

 

수차례 올라온 글을 본 결과 굉장히 여러 곳에서 어려움을 겪을수 있어 보입니다.

 

1. Ladder 내린 사진 올리고 다시 질문하시는게 좋겠습니다. Gel에 Ladder나 Positive control 걸으세요. Gel 촬영이 정확히 이루어지는지 컨펌하고 지나가야 합니다.

2% 겔은 어떻게 만드는지 부터도 알려주세요. 뭘 얼만큼 넣고 끓이나요? 용액은 누가 만들어서 얼마나 지났나요?

2. gDNA 농도 측정해 보세요. 제 개인적으로는 이거 큰 차이는 안난다고 생각하긴 하는데, gDNA 농도가 너무 높거나, OD 값이 심하게 틀어져 있으면 문제가 됩니다.

 

3. primer의 서열은 원칙에 맞게 잘 짜여졌나요? GC content를 비롯해서요. 게다가 실제로 mouse genome 상에서 들어맞는지 확인해야겠죠. 온도 조건은 어떤가요? 다른 사람은 PCR을 같은 조건, 같은 프라이머에서 성공한 적이 있나요?

 

4. DNA 샘플이 4면 너무 많습니다. 1로도 나와야 정상입니다. 오히려 그렇게 많이 넣으면 불순물이나 샘플에 관련된 용매로 인해 더 반응이 안나올거 같아요.

 

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