실험 Q&A Cell Biology > Cell Culture
면역세포 활성화정도 실험 중 면역세포 분리 과정 좀 봐주세요!
레벨1 2silvera (일반인)
1. 혈액 50mL를 동량의 Dulbecco's phosphate buffered saline 25mL에 넣고 혼합한다.
2. 혼합액을 다시 나누고 ficoll-paque를 넣어 원심분리한다.
3. 원심분리 후 혈액에서 ficoll 층 위쪽의 면역세포층을 얻어 DPBS로 3회 세척과 원심분리를 반복하여 순수한 면역세포를 얻는다.
4. 배지로 두 번 더 세척하여 남아있는 DPBS를 완전히 제거한다.
5. 10% fetal bovine serum이 첨가된 배지로 부유시켜 cell culture dish에 약 1시간 동안 배양한다.
6. 1시간 배양 후 부유된 림프구를 분리하여 배지로 3회 세척하여 모아 배양한다.
이 과정에서 혈액은 꼭 50mL를 사용해야 적당한건지, 혹시 양을 줄일 수는 없는지와 꼭 FBS가 첨가된 배지로 부유시키는 과정이 필요한건지 알려주세요!
생략해도 되는 과정이 혹시 있다면 알려주시면 감사하겠습니다! 부족한 저를 좀 도와주세요ㅠㅠ
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