실험 Q&A Microbiology > Bacteria
박테리아 SEM 샘플 만들어보신 분들 질문이요!
레벨2 다옹 (대학원생)
저희 실험실에 박테리아 SEM 해보신 분들이 없어서 일단 인터넷 서칭해서 알아낸 방법대로 했는데 부족한 부분이 있어 질문 남깁니다.
Q1. 표면이 조금 쭈글쭈글하게 나오는데 어떤 전처리 과정이 잘못된걸까요? 탈수가 조금 급하게 된건가요?
SEM operator께 여쭤보니 Pt 코팅 대신 OsO4 코팅을 하면 나을 수도 있다고 하시던데 이 점도 개선될까요?
Q2. 임계점 건조기가 없어 실온 건조를 했는데, 60도나 70도 오븐에서 건조를 해도 샘플이 상하지 않고 마를 수 있나요?
박테리아 SEM 샘플 만들어보신 고수분들 모든 피드백 환영입니다!!
제가 한 방법은 다음과 같습니다.
- Bacteria 1OD까지 키우고 PBS wash X 3 -> 추가 2h incubation
- PBS wash X2 -> 2.5% glutaraldehyde 넣고 4℃ overnight
- 다음날 PBS wash X 3 -> Ethanol로 탈수 (30, 50, 75, 85, 95, 100X2 10분씩)
- RT 후드에서 24h 건조
고정 이후에는 박테리아가 최대한 pellet 유지하게 했고 흐트러지면 추가 centrifuge했습니다. 마지막 SEM 샘플은 vortex로 pellet 최대한 부셔서 용액 10uL 따서 말렸습니다.
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